棉花体细胞培养及体细胞无性系变异初探-植物学专业毕业论文.docxVIP

摘 摘 要 棉花是一种重要的经济作物，但其体细胞培养却比较困难。本研究以七个陆地棉品种 (系)为材料，通过不同因素处理研究其适宜的培养条件从而进一步完善培养方法，获得 了冀棉7号和冀棉14号两个品种的体胚和再生植株；对川棉239品种的胚性愈伤组织系 和非胚性愈伤组织系的蛋白提取液进行了SDS分析。另外还对冀棉7号、冀棉14 号和川棉239三个品种的体胚苗和再生植株表型变异进行了观察，并通过石蜡切片法对川 棉239野生型和畸形茁茎端结构进行了差异比较，且与模式植物拟南芥的顶-基模式建成 ， 突变种作了类比。fr主要工作和结果如下： ＼ 1．愈伤组织及胚性愈伤组织的诱导 在MSB+IAA0．5mg／L+KT0．1mg／L和MSB+ZT0．1me,／t-1．0mg／L三种培养基上，品种 (系)间诱导愈伤组织有较明显的差别，且差别基本～致，冀棉7号和冀棉14号出愈率 较高，为78．2％．--95．2％，而渝棉l号、佳39、MP4、鲁棉15号则出愈率较低，为 47．6％嗡1．7％。冀棉7号和冀棉14号的愈伤组织经MSB+IAA0．1mg／L+KT0．1mg／L培养基 继代培养后诱导出了胚性愈伤组织，鲁棉系统的鲁棉15号未能得到胚性愈伤组织；而冀 棉14号再生植株种子的下胚轴也获得了胚性愈伤组织和体胚。 2．胚性愈伤组织体胚发生及再生能力 胚性愈伤组织经MSB+IAA0．Img／L+KT0．1mg／L和MSB+KT0．Irng／L+KN031．99／L两种 培养基交替使用并结合选择性继代后，其胚性能够保持，但愈伤组织在长期继代培养过程 中随着培养时问的延长和继代次数的增多，其体胚发生和再生能力均逐渐下降。 3．悬浮培养激素的添加 在悬浮培养基MSB+KN031．99／L中添加浓度为2mg／L-3 rng／L的NAA时，培养物在 继代前分散性较好，继代后量较多，且体胚成熟培养前培养物量增多，成熟培养后增殖较 快，在NAA为2mg／L时，有少量体胚和大量胚性愈伤组织产生，效果较理想。 4．体胚苗生根 以1／2MSB液体+蛭石作培养基时，体胚苗生根率较高，幼苗长势较好，移栽到大田 后容易成活，优于1／2MSB和I／2MSB+0．1％活性碳等固体培养基。 5．愈伤组织蛋白质的SDS．PAGE 四种愈伤组织系蛋白提取液的SDS分析表明，胚性愈伤组织系的蛋白质表达 不同于非胚性愈伤组织系，且胚胎发生能力不同的胚性愈伤组织系之间的蛋白质表达也存 在差异。 6．体胚苗变异和再生植株变异 6．体胚苗变异和再生植株变异 体胚苗变异类型丰富，发现了前人未曾报道过的两极长根的和顶端长成杯状真叶的异 常苗类型。在长时间继代培养过程中，随着培养时间的增加，畸形苗数量增多，体胚苗变 异频率逐渐升高，最高可达90％以上。 再生植株变异性状广泛，最为常见的是株型、叶片和育性等的变异，有的再生植株早 期表现为不育或部分不育，但随着生育期的延长，育性逐渐趋于正常；有的则在整个生育 期都始终不育。再生植株变异频率也在长期继代培养过程中随着培养时间的延长而逐渐增 大。 7．野生型与畸形苗显微结构比较 经石蜡切片后比较野生型与畸形苗的显微结构，野生型茎端可见生长锥、叶原基及子 叶结构：而无子叶畸形苗顶端仅有许多小的凸起，没有生长锥、叶原基及子叶结构；两片 和多片子叶畸形苗茎端仅有子叶却没有生长锥和叶原基结构；两极长根畸形苗，其芽极长 根端的根基部与茎端结构紧密相连。通过与拟南芥顶．基模式建成突变种相比较，发现几 种体胚苗变异类型分别与拟南芥的gurke，monopteros和shoot-meristemless三种突变种相 类似。 关键词：棉花；体细胞培养；体细胞无性系变异 Somatic Somatic Cell Culture and Somaclonal Variation in Cotton(Gossypiurn hirsutum￡．、 Candidate：Xue Meifeng Advisor：Prof．Li Mingyang Prof．Pei Yan (Research Center ofBiotechnology．SWAU，Chongqing．China) Abstract CoRon(Gossypiurn hirsutum L．)is an important industrial crop．However,it has been proved to be difficult to manipulate in somatic cell culture system．In this researcll，culture method was optimized by different factor treatn,七nts，somatic embryos and