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环境生物学实验 授课教师：高雪峰 种子发芽毒性实验 ——四季小白菜（小麦）种子在不同浓度铜、铬溶液中萌发率的变化 一、实验目的 通过本实验掌握测定环境污染对植物有效性的方法，了解测定污染物对种子发芽产生毒性的基本原理，掌握实验操作程序和步骤，能够独立进行实验数据计算和处理，并对结果进行分析。 二、实验原理 植物种子在适宜的条件（水分，温度和氧气等）下，吸水膨胀萌发，在各种酶的催化作用下，发生一系列的生理、生化反应。但是当有污染物存在时，污染物会抑制一些酶的活性，从而使种子萌发受到影响，破坏发芽过程，因此，通过测定种子发芽情况，可以预测和评价环境污染物对植物的潜在毒性和生物有效性。 三、实验材料及药品： 培养皿；发芽床；滤纸 ；小白菜种子（小麦）；温度计、 标签纸 ；分析纯氯化铜；分析纯重铬酸钾；蒸馏水。 四、实验步骤（8~9人/组） 1.取5只培养皿，铺上2层滤纸，分别编号1、2、3、4、5。 2.用蒸馏水将氯化铜原液（500mg/l）逐级稀释100mg/l、 200mg/l、300mg/l和500mg/l，将重铬酸钾原液（1200mg/l）逐级稀释200mg/l、500mg/l、800mg/l和1200mg/l。分别获得4种不同浓度的污染液。 3.向1、2、3、4号培养皿分别加入10ml（15ml）的不同浓度的氯化铜（或重铬酸钾）染液（浸湿滤纸即可），5号培养皿加入等体积的蒸馏水作为对照。 4.挑选籽粒饱满、大小一致的小白菜种子，在每只培养皿的滤纸上，均匀放置50粒小白菜种子。 5.将5只培养皿置于25℃、相对湿度75%、光照条件下的恒温培养箱中培养；每天各实验组、对照组补充5ml蒸馏水，以保持滤纸的湿润。 6.发芽势与发芽率的计算，在第3天（对照组发芽良好时）测定记录小白菜种子发芽情况。 发芽势（%）=规定天数内已发芽的种子粒数/供作发芽的种子总粒数×100 发芽率(%) =全部发芽的种子粒数/供作发芽的种子总粒数×100% 发芽势与发芽率的区别 种子的发芽率是指在足够的时间内，正常发芽的种子占全部供试种子的百分数。 发芽势则是在规定的时间内，发芽种子占供试种子的百分数。发芽势能表示种子发芽能力的强弱和种子发芽的整齐度。 所以，发芽势是鉴定种子生活力的重要指标。 五、注意事项： 1.种子发芽后应具备的特征：幼芽长度不短于种子长度的1/2，为具有发芽能力的种子，以此标准进行观察，计数。 2.发芽势与发芽率的计算，于第3天测定记录小白菜种子发芽的情况，将感染霉菌的种子要及时除去。 六、实验报告要求 1.根据实验要求，在实验时间内到实验室记录实验数据。报告要求准确、美观。 2.实验报告：种子名称，每种浓度处理的种子数，培养条件污染物的每种浓度处理制组和对照组的发芽率和发芽势的平均值。 3.对试验结果进行分析讨论。 温度胁迫对生物（植物）的影响 一、实验目的和意义 不良环境（如高温或低温）对生物的正常生存会产生不良的影响。植物在遭遇高温、低温时，原生质膜的半透性消失，对物质的透性发生改变，有机质或盐类从细胞中渗出，进入周围环境中。通过电导度的测量和糖的显色反应，可以测知物质的外渗程度，以了解植物受害的情况，并可对不同植物对高、低温的耐性程度做出判断。 二、仪器以及材料 电导仪，分光光度仪，冰箱，恒温培养箱，移液管，试管，烧杯，电热板，叶片，蒽酮试剂，葡萄糖 三、实验方法及步骤 1、样品的制备 将植物叶片清洗干净，再用蒸馏水漂洗干净后，用打孔器打取叶片。然后以10片为一组，共三组，分别放在盛有20ml蒸馏水的烧杯中，将叶片浸入蒸馏水中，分别放在 45℃温箱和0℃的冰箱中培养. 2、标准曲线的绘制 取标准葡萄糖溶液稀释成浓度为0、5、10、20、40、60、80、100ug/ml。在波长625nm处测其吸光度。得出吸光度— 糖浓度曲线。 水中细菌总数的检验 ——平板菌落计数法 一、目的要求 1.学习水中细菌总数测定的方法； 2.了解水源水的平板菌落计数的原则。 二、原理 平板菌落计数法——是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经培养，由每个单细胞生长繁殖形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落代表样品中一个单细胞。据形成的菌落数计数，换算出水中细菌总数（近似值）。 优点：传统计数方法，对设备要求不高。是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。 缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。 三、操作步骤 1、水