抗菌处理与液氮保存对同种瓣膜细胞活性及组织结构影响的实验分析-外科学专业毕业论文.docxVIP

四川大学临床医学硕士专业学位论文抗菌处理与液氮保存对同种瓣膜细胞活性及 四川大学临床医学硕士专业学位论文 抗菌处理与液氮保存对同种瓣膜细胞活性及 组织结构影响的实验研究 研究生：赖应龙 、 导师：张尔永 摘 要 目的：对目前常用的同种瓣制各方法的保存效果进行综合评价，探 讨制备过程中同种瓣生物活性和结构完整性的影响因素，为优化同种瓣 的制备方法，最大限度地保存同种瓣的生物活性和组织结构完整性提供 实验依据。 方法：本实验以6只猪的主动脉瓣和肺动脉瓣为研究对象，采用配 配伍组实验设计。每个瓣叶被分成2份，每只动脉瓣提供6个瓣叶片， 随机分到6个主动脉瓣或肺动脉瓣组，每组6个瓣叶片(n=6)。6个肿 动脉瓣组在含不同抗生素的DMEM液中，于不同温度下浸泡6h或24h。 6个主动脉瓣组经抗菌处理，并用速度控制降温容器或．20℃和一80。C的低 温冰箱梯度降温后，在液氮中冷冻保存1、3月。应用XTT比色法测定 瓣膜细胞活性，并结合光镜、透射电镜、以及间接免疫组织化学荧光行 组织学检测，分析比较抗菌处理与液氮保存对瓣膜细胞活性和组织结构 的影响。 结果：1)抗菌处理24小时，在37℃和4。C抗菌液中的瓣膜细胞活性 没有显著性差异(P0．05)。在37℃条件下，抗菌6小时的瓣膜细胞活 性明显高于抗菌24小时(P0．05)。在37℃抗菌液中加入10％d,牛血清 处理24小时，瓣膜细胞活性无显著性增高(P0．05)。在37℃条件下 抗菌6小时，低浓度的氟康唑与二性霉素B未明显降低瓣膜细胞活性(P 赫金项目：旧川省卫生厅科学研究基余资助项目0002I) j 四川大学临床医学硕士专业学位论文0 四川大学临床医学硕士专业学位论文 0 05)。2)抗菌时闻为6小时时，内皮细胞层完整且连接紧密，成纤维 细胞内波形蛋白与可溶性细胞外基质硫酸软骨素荧光密集；加入lO％FBS 可导致内皮细胞脱落、内皮下水肿；加入氟康唑与二性霉素B或将抗菌 时间延长至24小时，还可导致细胞外基质硫酸软骨素的流失；而各组瓣 膜胶原纤维结构无明显改变。3)液氮保存后瓣膜细胞活性明显下降 (P0．05)，内皮细胞脱落，成纤维细胞不可逆变性增加，细胞外基质纤 维连接蛋白与硫酸软骨素不同程度流失，间质胶原纤维排歹U紊乱，但胶 原横纹结构仍较清晰。冷冻保存1月与3月，结果无显著性差异。速度 控制降温容器组的瓣膜细胞活性和细胞超微结构、细胞外基质的完整性 均好于一20。C和培O℃的低温冰箱中各过渡2小时降温组。再次冷冻保存 后，瓣膜活性和组织结构损害迸一步加重。在保存液中加青、链霉素对 瓣膜活性和组织结构无明显影响。 结论：1)抗菌时间由24小时缩短至6小时，有助于瓣膜细胞活性 和组织结构完整性的保存。抗菌时间为24小时时，温度的影响作用不明 显；在抗菌液中加入10％小牛血清无助于瓣膜细胞活性和组织结构完整 性的保存；抗真菌药物氟康唑与二性霉素B均对瓣膜组织结构有一定影 响，氟康唑可替代二性霉素B用于同种瓣的抗菌处理，但无明显优势。2) 液氮玲冻保存将损害瓣膜的细胞活性和组织结构完整性，但在冻存时间 3月时，损害的程度与冻存时间无明显关系：速度控制降温容器可用于 同种瓣冷冻保存的梯度降温。冷冻保存的同种瓣一经解冻融化，不宜再 次冷冻保存后使用；在保存液中加入青、链霉素并不加重瓣膜的损害。3) 抗生素抗菌、液氮深低温保存的同种瓣，实际上是一个活细胞数量明显 减少、细胞功能降低、细胞外基质明显改变了的瓣膜，目前的同种瓣制 备方法需进一步完善和改进。 关键词：同种心瓣膜细胞活性抗菌处理液氮保存 XTT比色法 四川大学临床医学硕士专业学位论文Experimental 四川大学临床医学硕士专业学位论文 Experimental studies of effect of sterilization and cryopreservation Oil viability and structure of homograft valve Postgraduate：Laiyinglong Tutor：Zhang eryong Abstract Objective：To evaluate the general protocols of the homograff valve processing and storage，probe into effect of various factors on valve viability and structural integrity，and provide theory—experimental data for optimal preparation to save valve viability and structural integrity at most