米糖蛋白中血管紧张素转化酶抑制剂的提取及活性鉴定-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

华中科丰古士掌同济疾掌院 华中科丰古士掌同济疾掌院 2004届硕士学位论文 米糠蛋白中血管紧张素转化酶抑制剂的提取及活性鉴定 中文摘要 血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme，ACE)是含有 zn2+辅基的羧二肽酶，在血压调节中扮演重要的角色 。血管紧张素转化 酶抑制剂(ACEI)通过抑制血管紧张素I向血管紧张素II转换以及阻止 ACE降解缓激肽而起降血压的作用【2。31。目前已有许多合成的ACE抑制 剂药物，但由于药效持续时间不长，停药后会有反弹，使血压升高；而 且，这类药物对肾功能有一定损害【4～。因此，寻找食物来源的安全、有 效、无毒副作用的新型降压药具有重要意义。 近年来国内外研究表明，食物蛋白质酶解产物中的一些短肽具有广 泛的生理调节功能 01，如促进钙吸收、降血压、降低胆固醇、免疫调节 等。特别是具有降血压活性的ACEI已成为生物活性肽研究领域的重要 方面。由于食物蛋白来源的降血压肽安全性高，对高血压患者可以起到 降压作用而对正常血压者无降压作用，并且来源丰富，因而备受关注， 极具开发潜力。 本实验以米糠为原料，酶法制备ACEI。采用等电点沉淀的方法提 取米糠中的蛋白质。选用术瓜蛋白酶、蛋白酶k、胃蛋白酶和胰蛋白酶 对米糠蛋白质分别进行酶解，其完全水解的产物通过Sephadex G一15凝 胶层析法分离纯化，检测分离组分的ACE抑制活性。结果发现四种酶解 产物中都含有ACEI抑制活性的组分。其中从经木瓜蛋白酶完全水解的 水解产物中分离得到的最高ACE抑制组分， 其Ic50为O．32 mg／mL。从 经蛋白酶k完全水解的水解产物中分离的最高ACE抑制组分，其Ic50 为O．1lmg／mL。从经胃蛋白酶完全水解的水解产物中分离的最高ACE抑 制组分， 其Ic50为O．066mg／mL。从经胰蛋白酶完全水解的水解产物中 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2004届硕士学位论文 分离的最高ACE抑制组分，其IC50为O．182mg／mL。结果显示用胃蛋白 酶水解米糠蛋白可获得较强ACE抑制活性的多肽组分。 有研究指出一些从食物蛋白中提取的短肽在体外实验中证明有强的 血管紧张素转化酶抑制活性，用来喂养原发性高血压大鼠却无明显的降 压作用，考虑为具有抑制活性的关键序列被消化液中的酶迸一步降解所 致[1“，因此本研究在单一酶胃蛋白的水解基础上，再选用存在消化液中 的胰蛋白酶进一步水解，模拟体内消化环境，研究水解产物中ACE抑制 剂的活性变化。结果显示经胃蛋白酶完全水解的产物能被胰蛋白酶进一 步水解，产物发生变化，ACE抑制活性有所降低。 对经胃蛋白酶、胰蛋白酶联合水解后获得的活性最强的组分继续用 SP—Sephadex C一25离子交换层析法按电荷差异做进一步的分离纯化，最 终获得了一组具有较强ACE抑制活性的多肽组分，其Ic50为0．061mg／mL 分子量在300左右。为进一步的ACE抑制剂的结构研究及动物实验打下 了基础。 关键词： 米糠蛋白 血管紧张素转化酶 抑制荆 IC 50 兰±型垫查兰堕堕墨兰堕———_三塑生里堡主堂垡丝兰：一Preparation 兰±型垫查兰堕堕墨兰堕———_三塑生里堡主堂垡丝兰：一 Preparation and Activity Assay of ACE Inhibitor from Rice Bran Protein AbStract Angiotensin converting enzyme(ACE)is carboxy dipeptidase containing coenzyme Zn2+，which play all important role in the adjustment of blood pressure．The ACE inhibitors(ACEI)inhibit the converting of Angiotensinl to Angiotensin II and prevent ACE from degrading Bradyikinin， by this way to reduce the blood pressure．Today many kingds of synthetical ACEI have been made，but their inhibitor effect on ACE are reversible．So， the effect Can not last for long time and drug withdrawl Can cause the reboun．ce of blood pressure．And the synthetical medicine Can do har