钝齿棒杆菌的代谢改造L-鸟氨酸与L-瓜氨酸合成菌株的-微生物学报.PDF

微生物学通报 Oct. 20, 2014, 41(10): 1941−1947 Microbiology China © 2014 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.140065 研究报告 钝齿棒杆菌的代谢改造：L-鸟氨酸与L-瓜氨酸 合成菌株的构建 1 1 1* 1 1 1,2 赵芹芹 罗玉常 窦文芳 张晓梅 耿燕 许正宏 (1. 214122) (2. 214122) 摘 要【目的】对一株产L-精氨酸的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum) SYPA5-5 进行代 谢工程改造，构建L-鸟氨酸和L-瓜氨酸合成菌株，并考察其发酵生产相应氨基酸的性能。【方 法】分别敲除菌株SYPA5-5 鸟氨酸氨甲酰转移酶(Ornithine carbamoyltransferase ，OTC)的编码 基因 argF 和精胺琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthase ，ASS) 的编码基因argG ，构建能够 合成L-鸟氨酸及L-瓜氨酸的重组菌株 SYPA5-5△argF 和SYPA5-5△argG；考察不同营养条件 对上述重组菌株生长和相应氨基酸积累的影响。【结果】添加 0.3 g/L L-精氨酸可满足 SYPA5-5△argF 的生长及L-鸟氨酸积累所需，L-鸟氨酸产量可达21.5 g/L；添加L-精氨酸有利 于SYPA5-5△argG 的生长，但不利于L-瓜氨酸的积累；不添加L-精氨酸时，L-瓜氨酸产量可 达15.2 g/L，同时积累6.8 g/L 的L-谷氨酸。【结论】分别敲除L-精氨酸生产菌株SYPA5-5 的 argF 及 argG 基因，可实现 L-精氨酸合成途径的中间代谢物 L-瓜氨酸和 L-鸟氨酸的积累，拓 展了该菌株的工业应用范围。 关键词L- 鸟氨酸，L-瓜氨酸，钝齿棒杆菌，鸟氨酸氨甲酰转移酶，argF ，精胺琥珀酸合成 酶，argG Engineering Corynebacterium crenatum for construction of L-Ornithine and L-Citrulline producers ZHAO Qin-Qin1 LUO Yu-Chang 1 DOU Wen-Fang1* ZHANG Xiao-Mei 1 GENG Yan1 XU Zheng-Hong1,2 (1. Laboratory of Pharmaceutical Engineering , School of Pharmaceutical Science, Jiangnan University , Wuxi, Jiangsu 214122, China) (2. The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education , Jiangnan University , Wuxi, Jiangsu 214122, China) Abstract: [Objective] L-Ornithine a