葡萄糖氧化酶法测定血糖实验报告.docxVIP

葡萄糖氧化酶法测定血糖实验报告 　　葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖　　实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。在500nm处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。　　临床意义1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。　　2.病理性高血糖糖尿病患者。内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。　　3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。　　4.病理性低血糖。胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。　　注意事项1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上，待变旋平衡后方可应用。　　2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。　　3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g，氟化钠4g，加水溶解至100ml。吸取到试管内，在80摄氏度以下烤干使用，可使2~3ml血液在3~4d内不凝固并抑制糖分解。　　4.本法用血量甚微，建议使用微量加样器进行加样。如果使用吸管加样，应直接　　加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以减小误差的产生。　　5.严重黄疸.溶血及乳糜烂血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。　　方法评价本法线性范围至少可达∕L，回收率94%~105%，批内CV为%~%，批间CV为2%左右，日间CV为2%~3%。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，相关系数为。　　一、题目：葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度血糖测量仪：　　糖尿病患者需要经常独取静脉血以测定血糖，给患者造成一定的不便。有条件的患者可以自备l台血糖检验仪，所测指血或耳血为毛细血管的血糖值，略高于静脉血糖值。但要注意，当寒冷、水肿及血管痉挛时，稍受影响，其测定范围为〔0．5～27．7毫摩尔/升(10～500毫克/分升)〕。目前市场上常见的血糖仪按照测糖技术可以分为电化学法测试和光反射技术测试两大类。前者是酶与葡萄糖反应产生的电子再运用电流记数设施，读取电子的数量，再转化成葡萄糖浓度读数。后者是通过酶与葡萄糖的反应产生的中间物，运用检测器检测试纸反射面的反射光的强度，将这些反射光的强度，转化成葡萄糖浓度，准确度更高。　　目前市场上尚有笔式及其他型号微量血糖测试仪供使用。90年代以来国外研制出无损伤血糖检测仪，是用电脑化的近红外线透过皮肤面测量其吸收变化，可在5秒钟内测出2．22～22．2毫摩尔/升(40～400毫克/分升)血糖。　　二、实验目的　　教学目的　　学习葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定血糖浓度的基础上，掌握血糖的正常参考值，掌握肾上腺素对血糖浓度的影响，熟悉尿糖的半定量检测。　　教学要求　　掌握血糖的正常参考值，复习血糖的来源与去路；掌握肾上腺素对血糖浓度的影响机理。　　熟悉葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定血糖的操作步骤及注意事项。　　熟悉葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定血糖的原理，血清的制备，血糖浓度及血糖增高率的计算，尿糖的原因及尿糖半定量检测的原理及方法。　　(四)了解动物耳缘静脉取血法，血糖调节的几种因素及血糖测定的临床意义。教学内容　　实验原理：血糖的正常参考值，血糖的来源与去路，血糖调节的几种因素，肾上腺素对血糖浓度的影响机理，血糖测定的临床意义，葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定血糖的原理；尿糖的原因及尿糖半定量检测的原理。　　实验操作：血糖测定及肾上腺素对血糖浓度的影响；尿糖半定量检测。　　计算血糖浓度及血糖增高率。　　三、血糖定义：　　血糖指血液中所含的葡萄糖。正常人血糖浓度相对稳定，饭后血糖可以暂时升高，但不超过180mg/dl，空腹血液浓度比较恒定，正常为70-110mg/dl。血中的糖类，绝大多数情况下都是葡萄糖，还有乳糖、半乳糖。体内各组织细胞活动所需的能量大部分来自葡萄糖，所以血