洛伐他汀对巨噬细胞基质金属蛋白酶-2mRNA及蛋白表达的影响-心血管内科专业毕业论文.docxVIP

中文摘要洛伐他汀对巨噬细胞基质金属蛋白酶一2 中文摘要 洛伐他汀对巨噬细胞基质金属蛋白酶一2 mRNA及蛋白表达的影响 摘 要 目的探讨洛伐他汀对巨噬细胞基质金属蛋白酶一2(MMP一2)mRNA及 蛋白表达的影响及其除调脂外的抗动脉粥样硬化作用。 方法 ①在体外用含10％胎牛血清的RPMll640培养液培养小鼠腹腔 巨噬细胞，与不同浓度的洛伐他汀在37℃孵育。24 h后用MTT法检测洛伐 他汀对巨噬细胞的抑制作用。②应用原位杂交技术检测巨噬细胞内MMP一2 mRNA的表达，图像分析系统检测MMP一2mRNA的积分光密度，通过积分光 密度值判断不同浓度洛伐他汀对巨噬细胞MMP一2 mRNA表达的影响。③应 用免疫细胞化学技术检测巨噬细胞内MMP-2蛋白的表达，图像分析系统检 测MMP一2蛋白的积分光密度，通过积分光密度值判断不同浓度洛伐他汀对 巨噬细胞MMP一2蛋白表达的影响。④经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后， Western Blot方法鉴定MMPs类型。⑤资料统计应用随机区组设计的方差 分析、多均数间两两比较的q检验及直线相关分析。Po．05，说明统计学上 有差异；P(0．01，说明统计学上有显著差异。 结果 ①在细胞抑制实验中，当洛伐他汀浓度为0．01、0．1、1 tLmol／L时， 细胞存活率平均90％，对细胞几乎没有抑制作用；浓度为lO umol／L时，细 胞存活率90％，对细胞有明显的抑制作用。②原位杂交实验表明随着洛伐 他汀浓度的升高，MMP一2 mRNA的表达逐渐降低。各组之间均有显著的统 计学差异(Po．01)。洛伐他汀浓度与MMP一2mRNA的积分光密度呈负相 关(r一--0．774，Po．01)。说明洛伐他汀可呈剂量依赖性抑制MMP一2 mR— NA的表达。③免疫细胞化学实验证实随着洛伐他汀浓度的升高，MMP一2蛋 白的表达逐渐降低。各组之间均有显著的统计学差异(PO．01)。洛伐他汀 浓度与MMP一2蛋白的积分光密度呈负相关(r一～0．734，P(0．01)。说明洛 伐他汀可’呈剂量依赖性抑制MMP一2蛋白的表达。④Western Blot示对照组 中文摘要在72KDa和62KDa处出现黑色蛋白质条带，分别是MMP-2的酶原型和活性 中文摘要 在72KDa和62KDa处出现黑色蛋白质条带，分别是MMP-2的酶原型和活性 型；而洛伐他汀组只在72KDa处出现黑色蛋白质条带。 结论洛伐他汀可对巨噬细胞产生直接抑制作用，使其数量明显减少；同 时抑制巨噬细胞MMP-2 mRNA及蛋白的表达；还可能具有抑制酶原激活的 作用。以上均有利于动脉粥样硬化斑块的稳定。 关键词洛伐他汀；金属蛋白酶类；巨噬细胞；四氮唑蓝法；原位杂交；免 疫细胞化学 研究生：弭守玲(心血管内科) 导师：董果雄 英文摘要EFFECT 英文摘要 EFFECT oF LOVASTATIN ON mRNA AND PRoTEIN EXPRESSl0N 0F MATRIX METAL— LOPRoTEINASE一2 SECRETED BY MACRo— PHAGE ABSTRACT Objective To study the effect of lovastatin on mRNA and protein expression of Matrix Metalloproteinase-2 secreted by mouse maerophage and tO investigate the non— lipid meehanisms on antiatherosclerosis of lovastatin． Methyls①The conditioned media was generated by incubating the macrophage for 24 hours at 37℃with RPMIl640 supplemented with 10％FBS and different concentra— tions of lovastatin，MTT assay was adopted tO evaluate the inhibiting effect of lovastatin on macrophage．②In situ hybridization was used tO detect mRNA expression of MMP-2 in macrophage and integral optical density of MMP-2mRNA was detected by image anal— ysis system tO evaluate the effect of different concentrations of l