第六章_植物转化载体的构建.pptVIP

植物转化载体的构建 根据其诱导的植物冠瘿瘤中所合成的冠瘿碱种类不同分： 章鱼碱型（octopine） 胭脂碱型（nopaline） 农杆碱型（agropine） 琥珀碱型（agrocinoine） Ti质粒结构 T-DNA(Transfer DNA) 是农杆菌侵入植物细胞时从Ti质粒上转移到植物细胞的一段DNA； T-DNA两端各有一段25bp的同向重复序列，是T-DNA的边缘区（LB和RB）； 在同一条单链的LB和RB内各形成一个缺口，单链T-DNA进入植物细胞。 存在缺陷 Ti质粒分子量过大，一般在160～240kb，在基因工程中难以操作； 很难找到单一的酶切位点； 生长在培养基上的植物转化细胞产生大量的生长素和分裂素阻止了细胞再生长为整株植物； Ti质粒只能在农杆菌中复制、繁殖而扩增，不能在大肠杆菌中复制。 Ti质粒上还存在一些对于T-DNA转移不起任何作用的基因。 Ti质粒的改造-去除致瘤基因Onc 由于影响植株再生的直接原因是T-DNA中的Onc基因的致瘤作用，因此，切除其致瘤基因，使成为无毒的质粒，即“卸甲” 、“解除” 、“缴械”其“武装”的Ti载体，记为Onc-，构建的Onc-载体叫“卸甲载体”。 卸甲载体：构建无毒的Ti质粒载体 例：pGV3850是从胭脂碱Ti质粒PTIC58衍生而来的。 onc+卸甲载体 onc+卸甲载体是失去部分核心区基因的Ti质粒。