罗氏沼虾促性腺激素的分离纯化及其生理功能检测-生理学专业毕业论文.docxVIP

论文题目：罗氏沼虾促性腺激素的分离纯化及其生理功能检测专业：生理学 论文题目：罗氏沼虾促性腺激素的分离纯化及其生理功能检测 专业：生理学 硕士生：任静 指导老师：龙天澄副教授 廖家遗教授 摘要 罗氏沼虾是我国主要的淡水养殖虾类，研究其卵巢发育的促进激素，可推进 其养殖的发展，有助于其它虾类的卵巢发育机理，并可完善甲壳动物的内分泌学 的研究。 本实验以罗氏沼虾为研究对象，首先对其卵黄磷蛋白进行了纯化和多克隆抗 体的制备，并且对其抗体进行了效价测定和免疫检测。结果表明，ELISA法确定 抗体效价达1：20，000。免疫印迹结果显示该抗体与日本沼虾卵巢蛋白存在免 疫交叉反应，与罗氏沼虾肌肉抽提液及斑节对虾卵巢蛋白不存在免疫交叉反应。 说明制备的抗体具有特异性，能有效用于检测Vn的含量；并且证明罗氏沼虾与 日本沼虾卵巢蛋白存有一定同源性，与斑节对虾卵巢蛋白差别较大。 利用制备的vn抗体以及免疫沉淀的方法，对该虾脑抽提液的Sephadex G．50 凝胶过滤层析及其高压液相色谱层析(HPLC)的组分进行活性检测。同时比较 了卵巢发育至III期及其卵巢完全未发育的虾脑层析波谱。结果表明，处于性腺 发育期的虾脑的小分子蛋白组分比未发育期虾脑的相应组分更为复杂。在HPLC 之后得到的9个含量较高的蛋白峰之中，峰IlI能够非常显著地特异性地促进Vn 的合成。 目前，对于罗氏沼虾的研究多集中在细胞学及其激素分泌，电生理学研究缺 乏。利用全细胞膜片钳技术记录培养12．24小时不同形态罗氏沼虾眼柄视神经节 端髓x器官(MTXO)神经内分泌细胞的全细胞及其钾、钠、钙离子通道电流及其 端髓x器官(MTXO)神经内分泌细胞的全细胞及其钾、钠、钙离子通道电流及其 GSH对钙离子电流的调控作用．结果表明，罗氏沼虾眼柄MTXO中分布的A、B、 C三种类型神经分泌细胞均可记录到由内向电流和外向电流组成的正常全细胞 电流。内向电流由高电压激活钙离子通道电流(Ica)和对TTx敏感钠离子通道 电流(IN。)组成。lc。的激活电压为．30mV，在0～+20mV电压下达到峰值，在． 40mV和．70mV保持电压下记录的Ica激活阈值、初始峰值及卜v曲线无明显 差别。外向电流明显，幅值较大，包括对4．AP敏感的快速激活、快速失活钾离子 通道电流(IA)和对TEA敏感的缓慢激活、缓慢失活钾离子通道电流(Ik)。记 录到GSH对lc。有一定的阻滞作用。 关键词：罗氏沼虾，促性腺激素，卵黄磷蛋白，多克隆抗体，纯化，高限液 相色谱，免疫沉淀反应，神经分泌细胞，离子通道 STUDIES STUDIES OF PURIFICATIoN AND PHYSIoLoGICAL FUNCTION OF GONAD-STIMULAnNG HoRMoNE IN MACROBRACHIUM ROSRNBERGII(Decapoda crustacea) Major：Physiology Name：Ren Jing Supervisor：Long Tiancheng Associated Professor Liao jiayi Professor Abstract A vitellin(Vn)was purified from the mature ovaries of the prawn 0￡ rosenbergii)by gel filtration．DEAE-Sepharose FF and polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)．And polyclonal antibody was produced against the Vn．The value of the antibody was 20，000 with a dymamic range of 6．8—500ng by an enzyme—linked assay rELlSAl．11le antibody was also used to test cross-reactivity on ovary proteins of M niponense and Penaeus mondon by wastern．blotting．Results demonstrate that．the antibody can recognize both subunits of M niponense but neither subunit of．P moHdo硅． Gonad．stimulating hormone(GSH)was isolated from the brain of matured female M．rosenbeergii by means of Sephadex G一50 gel