抗端粒酶RNA核酶体外切割卵巢癌端粒酶RNA的实验研究-妇产科学专业毕业论文.docxVIP

英文缩写英文缩写 英文缩写 英文缩写 英文全移 中文名称 A Absorb8rice 吸光度 Avidin．HRP Avidin．horseradish peroxidase 亲和素标记 辣根过氧化物酶 bp Base pairs 碱基对 BSA Bovine seruin albumin 牛血清白蛋白 DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦碳酸二乙醣 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 DNase DeOxyribonucicasc 脱氧核糖核酸酶 EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 HBV Hepatitis B virus 乙型肝炎病毒 HJV Human immunodeficienoy virus 人类免疫缺陷病毒 hTERT The catalytic protein subunit 入端粒酶催化蛋白亚单位 of telomerase hTR Human telomerase 人端牧酶RNA IVS Imervening sequence： 居问序歹1j IJR Long terminal repeat 长末端重复序列 MDR Mulli·drubs resistance 多药耐药 MTT Thiazolyl bluc 噻疃蓝 Oligo(dO Oiigodeoxythymifylic acid 寡聚烧氯臆苷酸 pAGE Ploy acrolamide gel 聚雨烯酰胺凝胶电泳 eleetrophoresis PBS Phosphate-buffered saline 磷酸缓冲渡 RT．PCR Reverse transcriptase 反转录聚合酶链反应 l 第四军医大学硕士论文polymerase 第四军医大学硕士论文 polymerase chain reaction RZ Ribozyme 核酶 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 SSC Sodium chloridelsodium 氯化钠，柠檬酸纳 citrate(buffer) (缓冲渣) TAE Tris／acetale／(buffer) Iris／乙酸电泳缓冲液 TBE Tristborate elcctrophorcsis Tris／硼酸电泳缓冲液 TEMED N，N。N’，N’一 N，N，N’。N’四甲基乙二胺 tetramethylethylenediamine Telomerase—associated protein 靖粒酶相关蛋自 2 第四军医大学硕士论文抗端粒奠RNA核奠蠕粒一体外切翻卵巢癌螭粒酶RNA的 第四军医大学硕士论文 抗端粒奠RNA核奠蠕粒一体外切翻卵巢癌螭粒酶RNA的 实验研究 中文摘要 硕士研究生 王红英 导 师 辛晓燕 第四军医大学西京医院妇产科。 西安， 710032 ／卵巢癌是女性生殖器育景常见的恶缝肿瘤，尽管目前在其诊断手 段和治疗方法上已取得了一定的避展。但其死亡率仍无明显改善，5 年生存率始终低于30％。在治疗上尚无突破性进展，因此卵巢癌的治 疗已成为妇科肿瘤的难点研究课题．端粒是真核细胞线性染色体末端 的蛋白质一DN^结构，保护和稳定染色体的末端，在细胞分裂过程中， 端粒重复片断不断丢失。细胞衰老，而大多数肿瘤细胞表达端粒酶来 维持端粒长度和阻止细胞衰老，因此，针对端粒酶为靶点的肿癌基因 治疗具有更广阕的应甩前景，而通过榱酶切割螭牡酶RNA以阻断端粒 酶表达是可行绫略之一。 因此—为了观察靖粒醮特异性棱酶对卵巢癌缅胞生物学特性的影 响，进一步探讨其临床应用的可能性．我们进行了如下实验： l 援麓载体的构建与鉴定 根据端粒酶RH^的eDNA序列．针对 其模板区设计了锤头状核酶。井通过基因重组的方法将其定向克隆入 载体中，构建梭群体外转录载体及翼棱袁达载体．通过RT-PCR扩增获 得端粒酶模板两侧约大小的基因片断，定向克隆入载体后构建成功体 第四军医大学硕士论文外作用模板簸体．上述载体均经全自动序列分析证实序列完全正确． 第四军医大学硕士论文 外作用模板簸体．上述载体均经全自动序列分析证实序列完全正确． 2 核酶体外活性鉴定 核酶及模板载体经体外转录后进行体外 切割反应，6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、放射自显影、薄层扫描结果 表明，核酶的切割效率为6896． 3核酶对卵巢癌细胞系H0-8910细胞生物学特性的影响 通过 LipofectAM]NE将构建好的棱黪真校表达载体转染卵巢癌细胞 H0-8910 RNA斑点杂交证实转染成功．转染后第三代细胞进行MTT检 测细胞周期，发现其潜伏期延长，对数生长期减缓，同时流式细胞仪 观察发现其■硼细胞比例砗低。鼠期细胞比例增高(PO．01)。端粒