慢性应激对大鼠脑内NMDAR1蛋白表达及NO含量的影响-精神病与精神卫生学专业毕业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文慢性应激对大鼠脑内NMDARl蛋白表达及NO含量的影响 浙江大学硕士学位论文 慢性应激对大鼠脑内NMDARl蛋白表达及NO含量的影响 浙江大学医学院 精神病与精神卫生学 硕士生 陈巧珍 导师 李惠春 摘 要 背景 抑郁症病因未明，具有较高的发病率和复发率，并给社会带来了沉重的疾病 负担。现有的抗抑郁药物起效较慢、疗效有限；而且，有的药物对神经递质的 作用机制相反却同样能产生抗抑郁效果，这些临床矛盾现象很难用单胺理论来 解释。近年来，国内外研究人员利用各种抑郁模型作了大量有关神经生物和精 神药理方面的研究。鉴于应激与抑郁发病的密切关系．应激模型在抑郁发病机 理的研究和抗抑郁药的筛选中应用最为普遍。越来越多的证据表明抑郁的发生 以及抗抑郁药物的作用机制相当复杂，涉及到脑内多种物质和通路的异常，但 仍未找到最后通路。 谷氨酸是脑内重要的兴奋性神经递质，大量研究显示，该通路中的N一甲基 一D一天冬氨酸(N．Methyl-D—Aspire，NMDA)受体参与了兴奋性突触传递、神经 可塑性、神经发育与老化、学习和记忆等重要生理过程。目前，谷氨酸的兴奋 性毒性作用也被认为与一些神经精神疾病如脑血管疾病、创伤、癫痫、精神分 裂症的病理机制相关。有关NMDA受体与焦虑抑郁障碍的研究较少，但体外实 验已提示某些抗抑郁药物能够直接阻断NMDA受体通路与一氧化氮合酶(Nitric oxide synthesis，NOS)的表达和活性；而一些NMDA受体拮抗剂或NOS抑制 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 剂可能具有类似的抗抑郁作用。有关慢性应激抑郁模型脑内NMDA受体主亚基 蛋白NRl的表达情况国内外尚未见报道。 目的 本研究拟采用慢性轻度应激和分养两种经典模型缔合的方式，利用长期不可 预见性的轻度应激来建立大鼠抑郁模型，结合大鼠体质量及行为学变化，分别 采用分光光度法和免疫印迹技术检测抑郁大鼠前额叶、海马区一氧化氮(Nitric oxide，NO)含量和NMDA受体主亚基蛋白(NRl)表达的变化，旨在揭示慢 性应激对谷氨酸--NMDA受体--NO通路的影响，探讨抑郁发生的可能机制， 为抗抑郁药物的研制与开发提供线索。 方法 将16只成年雄性Sprague．Dawley大鼠随机分为对照组和慢性应激模型组， 采用变换饲养环境、昼夜节律以及调整饮食和供水等多种慢性轻度不可预见性 应激建立大鼠抑郁模型，以体质量及行为学改变来确保模型的可靠性。在建立 模型的基础上采用分光光度法检测大鼠前额叶和海马区NO含量的变化：免疫 印迹法分析相应脑区NRl的表达情况。 结果 1，模型组大鼠体重增长缓慢，活动能力下降，兴趣丧失，成功模拟了临床 抑郁症的精神抑制症状。到建模结束时，对照组和模型组的体重增加量分别为 (128．19±18．22)g和(80．75±13．38)g，两组间差异具有显著统计学意义 (P=-O．000)：在敞箱实验中，模型组大鼠活动量(22．62±12．26)明显少于对照 组(43．75±19．88)，差异具有统计学意义(P=-O．023)：模型组大鼠应激前后的绝 对蔗糖消耗量分别为(82．31±10．08)g和(70．81±13．59)g，后者少于前者，但 差异未达到统计学意义(户eO．060)，而相应的相对蔗糖消耗量(绝对量／体重) 分别为(O．28±0．03)和(O．19+_0．04)，差异具有显著统计学意义(尸tO．001)。 2．长期轻度应激后，大鼠前额叶和海马区NO的含量均明显增加，对照组 与模型组大鼠前额叶区NO含量分别为(26．97士1．38)nmol／mg．pro N(31．00±2．55) 浙江土学硕十学位论文nmol／mg·pro(P=-0 浙江土学硕十学位论文 nmol／mg·pro(P=-0 002)，相应海马区的NO含量分别为(36．06+0．87)nmol／mg·pro 和(38．11±1．73)nmol／mg·pro(尸e0．010)。相关分析显示，抑郁模型大鼠海马区 NO含量与大鼠的自发活动量呈负相关(r=一0．755，P=O．031)。 3．免疫印迹分析提示，慢性应激会增加大鼠海马区NRl的表达(尸t0．004)， 而前额叶区的NRl表达却未见有明显变化(辟O．659)。抑郁大鼠海马区NRl的表 达量与活动量具有相关性(r=一0，719，P=0．045)。 结论 1．研究将慢性轻度应激和分养两种经典模型结合，利用长期不可预见性的 轻度应激，成功建立了较为理想的抑郁动物模型，这为深入研究抑郁发病机理 提供了实验平台。 2．慢性应激可促进前额叶、海马区NO的合成：同时呵增加海马区NRl的 表达；海马区的这些变化与大鼠的自发活动量密切相关。结果提示脑内特定部 位NO含量和NRI亚单