抗鸭胸腺细胞单克隆抗体的制备及其免疫组织化学研究-预防兽医学专业毕业论文.docxVIP

摘要本实验以成年鸭胸腺细胞为免疫抗原，免疫BALB／c小鼠，分离脾细胞，并与SP2／0 摘要 本实验以成年鸭胸腺细胞为免疫抗原，免疫BALB／c小鼠，分离脾细胞，并与SP2／0 骨髓瘤细胞融合，获得了5株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞(B6、B8、C12、 E6、H5)。经鉴定可在体外长期培养，并能持续、稳定的分泌抗体。 通过免疫组织化学方法．以5株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体为第一抗体，以HRP 标记的羊抗鼠Ig抗体作为第二抗体，DAB．H202做底物，示踪单克隆抗体阳性细胞在鸭 免疫器官(胸腺、法氏囊和脾脏)不同发育时期的发生与分布，实验结果表明B8、c12、 E6、H5四株杂交瘤细胞分泌的抗体在组织中反应的阳性细胞是一致的。在8周龄鸭胸 腺的髓质中大部分的淋巴细胞染色，皮质中致密排列的小淋巴细胞不染色。1日龄、1 周龄、16周龄鸭胸腺中情况基本一致。在24周龄鸭胸腺的髓质中只有少部分淋巴细胞 染色。法氏囊滤泡的皮质和髓质以及粘膜上皮与淋巴小结相连的部位均有阳性细胞分布． 细胞形态不同，有少量淋巴细胞(主要分布于皮质和膜上皮与淋巴小结相连的部位)和 胞浆中具有分泌性物质，形态不规则的淋巴样细胞(主要分布于髓质中)呈阳性，分布 情况在不同日龄鸭的法氏囊中变化不大。在鸭脾脏的生发中心只有极个别的淋巴细胞和 树突状细胞染色，大部分的淋巴细胞不染色，生发中心外周淋巴细胞染色明显。红髓中 的浆细胞和红细胞不染色。动脉周淋巴组织和椭圆体周游巴组织中的、淋巴细胞多数染色。 B6株杂交瘤细胞分泌的抗体在鸭胸腺中染色结果与C12株分泌的抗体的染色结果相似， 为髓质中部分成熟的淋巴细胞染色。在法氏囊滤泡中多数的淋巴细胞和上皮细胞染色。 脾脏生发中心有部分淋巴细胞染色。C12等四株杂交癯细胞分泌的抗体所反应的阳性细 胞是成熟的T淋巴细胞和树突状细胞。B6株杂交瘤细胞分泌的抗体所反应的阳性细胞 是成熟的T淋巴细胞和B淋巴细胞以及上皮细胞。 本研究为鸭T淋巴细胞的分离．群及亚群的鉴定，以及在鸭免疫系统中淋巴细胞的 功能性研究，提供了一定的物质基础。并为研究免疫细胞在鸭机体内的发生与分布，提 供了一定的依据。 关键词鸭；单克隆抗体；淋巴细胞；表面标志 东北农业大学农学硕士论文PREPARTIoN 东北农业大学农学硕士论文 PREPARTIoN AND IMMUNOHISToCHEMICAL STUDY OF MoNoCLoNAL ANTIBoDIES To DUCK THYMoCYTE Abstract Repeated immunization of normal BALBlc mice with separated thymocyte from mat[1ie duck result in the production of antibodies which react with duck thymocyte surface antigens． Five monocional antibody—producing hybridomas(B6．B8．C12．E6．H5)Were isolated from immunized BABL／C mice showing this property．During the 8 weeks ofthe passages，the five hybridomas were tested for their stability of secreting antibodies，the result indicated that the five hYbridomas have the abilities to secreting antibodies stably． In the immtmohistochemistry experiment，tracing the originating and distributing of lymphoeyteS which reacted with monoclonal antibodies in duck spleen，thymus，and bursa of di俄rent development stages．The result indicated the four monocional antibedies (B8．C12．E6．H5)had resembling characteristic ofreactivity which were出at，a large proportion oflymphocytes were stained jn the medulla ofthymus of8 week-old duck．but densely pac