血红蛋白的提取与分离I.pptVIP

* * 教学目标 教学重点 教学难点 理解色谱法、电泳法等分离大分子的基本原理 了解缓冲液的组成及其作用 血红蛋白的分离－－样品处理 凝胶色谱法的原理 电泳法分离大分子的原理 一、基础知识――蛋白质提取和分离原理 蛋白质提取与分离的依据－－蛋白质的物化理性质： 形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、 亲和力等千差万别。 提取分离方法 凝胶色谱法 凝胶电泳法 1.凝胶色谱法 （1）原理： （2）材料 大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。 多孔性的多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 1.凝胶色谱法 （3）分离过程 混合物 上 柱 洗 脱 大分子流动快 小分子流动慢 收 集 大分子 收 集 小分子 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。 如H2CO3/NaHCO3，HC/NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等 1.凝胶色谱法 （4）缓冲溶液－－洗脱剂 组成： 配制： 作用： 调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 抵制外界酸碱对溶液pH的干扰而保持 pH稳定。 2．凝胶电泳法： （1）原理： 不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同， 在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同