第五章动物细胞制药-第四节动物细胞的培养条件和培养基.pptVIP

第四节 动物细胞的培养条件和培养基 细胞体外培养基本条件: ①无菌 ②营养充足,防止有害物质 ③氧气 ④随时清除代谢有害物质 ⑤良好的生存外环境 ⑥及时分种 一、动物细胞的培养条件 ⒈器材的清洗和消毒 ⑴器材的清洗 浸泡、刷洗、泡酸、冲洗 ⑵器材的消毒灭菌 物理消毒 化学消毒 ⒉ 水质 :电阻值大于18MΩ,去热原。 ⒊ pH:7.2～7.4 ⒋ 渗透压:290～300mOsm/kg ⒌ 温度:37±0.5 C ⒍ 空气:氧的饱和质60%,氧分压4～0.7kPa 二、动物细胞的培养基的种类和组成 分3类: ⒈天然培养基 ⒉合成培养基 ⒊无血清培养基 ⒈天然培养基 血清、羊水、腹水等,成分复杂、成分不稳定 ⒉合成培养基 DME、 MEM、 DMEM、 HAM F12、RPMI1640 ⑴氨基酸 ⑵维生素 ⑶糖类 ⑷无机盐 ⑸其它成分 如：添加小牛血清 添加小牛血清的作用 ⑴提供生长因子和激素 ⑵提供贴附因子和伸展因子 ⑶提供结合蛋白 ⑷提供必需脂肪酸和微量元素 ⒊无血清培养基 ①提高重复性 ②减少微生物污染 ③供应充足稳定 ④产品易纯化 ⑤避免血清因素对细胞的毒性 ⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰 无血清培养基加入添加剂 ⑴生长因子和激素 ⑵结合蛋白 ⑶贴附因子和伸展因子 ⑷有利细胞生长的因子和元素 一 细胞分离 1. 离心分离法 2. 消化