黄瓜抗真菌基因遗传转化体系的研究-植物学专业毕业论文.docxVIP

硕士学位论文 黄瓜抗真菌基因遗传转化体系的研究 东北农业大学 摘要 黄瓜在我国蔬菜周年供应上占有重要地位、但易受多种真菌病害的危害而使产量降 ? 低、品质下降。传统的育种方法周期长、耗资大、效率低、受抗性基因资源匮乏的限制、 还易出现抗性退化的现象，且黄瓜具有严重的有性杂交不亲和障碍，用这种方法很难得 到具有抗性的优良品种。因此，本研究通过基因工程手段，利用农杆菌介导法首次将抗 a 真菌基因(菜豆儿丁质酶基因〉导入黄瓜，建立了黄瓜高效的植株再生 体系和遗传转化 体系‘;言:i才了影响植株再生频率和 1追才专转f七效率的主要因素，确立了最佳的植株再空手 Il 遗传转化条件，获得了阳性转基冈植株。 l主要研究结果如下: 1 外相体手JI 基因型对器宫发生的影响\ 子叫-iI是最佳的外植体:最适宜的芽诱导 培养基J..; l\.1S+6-BA 1mg!L 基因型对再生频率影响差异极显在.再生频率最高的是 长 春密刺，为 93.2%. 其次是 μ叶三旱黄瓜，为 40.1% t 老朱少最低，为 10.6%。 2 脖、糖浓度对体细胞胚胎发生的影响 较高的胖、糖浓度有利于胚胎发生 e 胚性愈 伤诱导最适宜的茂糖浓度为 9%: 6%的庚糖有利丁胚的形成和!萌发。 3 基因烈及 PGR 对体细胞胚胎发生的影响 时兰早英瓜胚形成率是 高，总 67.1%. 而 t. 1夭春密刺及 h 名来少儿乎无胚的形成 。胚诱导培养基中的 PGR 对胚的 形成也有影响，最适宜的 PGR 配比为 NAAO.5m g/L、 6-BA0 .5mglL。 4 黄瓜 传转化的最适 宜条付 子叶丁丁子页tg养 1-2 天，真空侵染 5 分钟，在含有 6-BA1 mg!L、乙酌丁香翻 (AS) 100阳刚IL、pH5，2 的 MS 培养基上进行培养，遗传转化 效率最高。最佳的选择压力为卡那霉素 30mgIL 5 转基冈槌株的检测 分别用两对引物对 To 代再生植株进行 PCR 检测，约束i￡ 吞密刺的 88 株阿生植株中，有 50 株为阳性. IJ 再生油株的 56.82% ，以起始外植体计 筐，阳性率为 3.84%: 叶二早黄瓜，. 14 株再生怕株中有 10 株为?U性 t i 再生检株的 71.43% ，以起始外拍休计算 ，阳性率为 3.09% 0 PCR 检测结果可初步证明目的基因己整 合剑英瓜基因绍中。 L ， 关键词 黄瓜，几丁质酶基因，农杆菌介导法，遗传转化 ? 侯爱菊 摘 要 2001 年 5 月 Study 00 Transfer of Fungi-resistant Gene ioto Cucumber ， ?， Abstract Cucumber plays an important role in vegetable suppl弘but it was suffered from many kind s ofFungí easily.which can decrease its yield and deteriorate its quality. Traditional method of breeding has many disadvantages.such as )ong period ，huge investment and low efficiency..lt ìs a)so restricted to the shortage of resistant genes .There is devolutìon of resistance in resistant cultivar.Cucumber exist serious hamper of sexual hybridízation..So it is difficult to obtain the superior cultivar with high resístance.η1is srudy established a hìghly efficient regeneration system of cucumber and then tTans也r the fungi-resistant gene(bean chitinase gene)into cucumber，which mediated by 々robacferiwn fum可{aciens.This has Ilot been studied in p陀VIOUS repons in China.The inregrati on of ta电et gene into cucumber genome wa.s anaJyzed.The factors í