黄连HPLC指纹图谱、体外改善胰岛素抵抗活性及其相关性的探索分析-药物化学专业毕业论文.docxVIP

成都中医药大学硕士学位论文 成都中医药大学硕士学位论文 I I 摘 要 黄连为毛茛科植物黄连 Coptis chinensis Franch、三角叶黄连 Coptis deltoiden Y. Cheng et Hsiao 或云南黄连 Coptis teeta Wall. 的干燥根茎，是中医临床常用 药物，始载于《神农本草经》。其功效清热燥湿、泻火解毒，用于治疗湿热痞满， 呕吐，黄疸，高热神昏，心火亢盛等。但自魏晋时《名医别录》即有黄连“主 止消渴”之说，可知黄连常配方用治疗消渴是历代本草所载，有充分实践依据的。 现代研究也发现黄连及其复方可有效改善胰岛素抵抗，用于 2 型糖尿病及其并发 症的防治，但是其药效物质基础研究仅限于主要化学成分小檗碱，其他成分活性 成分尚不明确。 目的：探索改善胰岛素抵抗生物效应与 HPLC 指纹图谱的相关性，并用于不 同产地黄连药材的质量评价。 方法： 1. 主要采用分步结晶法和 C18 反相硅胶柱色谱法分离纯化小檗碱等黄连 5 种 主要生物碱； 2. 采用 RP-HPLC 法，测定黄连不同产地样品中 5 种主要生物碱类成分含量 并建立化学指纹图谱； 3. 采用体外培养 3T3-L1 前脂肪细胞，以 MTT 法测定药物对细胞增殖的影 响、油红 O 染色定量测定药物对细胞诱导分化的影响，比色测定药物对脂肪细 胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用的影响，筛选黄连改善胰岛素抵抗活性组分； 4. 测定不同产地黄连药材水提物对体外培养脂肪细胞胰岛素抵抗性质的影 响，并采用不同数理统计方法（主成分分析，聚类分析，灰色关联分析等）综合 分析生物效应与 HPLC 指纹图谱的相关性，探索以生物效应与 HPLC 指纹图谱 关联分析的黄连质量评价方法。 结果： 1. 分离纯化得到 5 个生物碱单体：盐酸小檗碱，盐酸黄连碱，盐酸巴马汀， 盐酸药根碱，盐酸表小檗碱，为化学分析及活性筛选提供对照。 2. 对比分析了不同产地黄连中 5 种主要生物碱类成分含量并建立了 [ 课题来源 ]国家“十一五”科技支撑计划地方专项课题（课题编号：2007BAI40B05）。 II II RP-HPLC 化学指纹图谱，相似度客观地表征了其化学特征信息的差异性，结果 表明化学特征信息能较好地用于黄连的化学成分分析和质量评价。 3. 黄连生物碱部位和非生物碱部位，小檗碱、巴马汀、黄连碱、药根碱、 表小檗碱5种生物碱单体成分在体外对脂肪细胞胰岛素抵抗性质均有不同程度的 改善作用。除浓度为6μg/L的非生物碱部位促进前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分 化外，其余成分作用均主要表现为显著或部分促进前脂肪细胞的增殖，抑制前脂 肪细胞向成熟脂肪细胞的分化，促进脂肪细胞对葡萄糖利用。 4. 不同产地黄连药材水提物均能显著或部分促进脂肪细胞葡萄糖利用，但 不同产地的样品作用强度差异较大。从葡萄糖利用改变率可以看出，来自于四川 省彭州市的黄连样品HL-008和HL-012，以及四川省洪雅县的黄连样品HL-019， HL-020对脂肪细胞葡萄糖利用的改变率较大，显示出其在改善胰岛素抵抗活性 上具有一定的优势。 5. 综合分析可知，各共有成分与改善胰岛素抵抗活性均有不同程度的相关 性。灰色关联度排序为：色谱峰 10 色谱峰 6 色谱峰 15（巴马汀） 色谱峰 3 色谱峰 7 色谱峰 4 色谱峰 13（表小檗碱） 色谱峰 2 色谱峰 12（药 根碱） 色谱峰 11 色谱峰 9 色谱峰 14（黄连碱） 色谱峰 5 色谱峰 8 色谱峰 1 色谱峰 16（小檗碱）。 采用聚类分析法，分别将重庆、湖北和四川黄连产区的样品聚为两个大类， 结合生物效应的聚类分析基本能正确区分代表该产地药材质量的样品。 结论： 1. 尽管不同产地的黄连（味连）样品在产地、生长环境等方面存在差异， 但样品化学指纹图谱之间仍有较高的种内相似度（﹥0. 99），仅各成分相对含量 有一定差异。来自四川省洪雅县，峨眉山市以及湖北省利川市的黄连（味连）样 品从生物碱等化学成分含量上来看质量较好。 2. 从化学成分含量以及改善胰岛素抵抗作用综合评价，发现四川省洪雅 县、峨眉山市等产地的黄连（味连）药材质量显示出一定的优势。 关键词：黄连；3T3-L1 前脂肪细胞；胰岛素抵抗；HPLC 指纹图谱；质量评价 PAGE PAGE IV Abstract Rhizoma Coptidis which was first recorded in Shen Nongs Herbal is the rhizoma of Coptis chinensis Franch., C. deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao and C. teeta Wall., of which