细胞工程(第一次课).pptVIP

第三章 细胞工程 第一节 细胞工程概述 一、细胞工程概念 细胞工程是指以细胞作为研究对象，应用细胞生物学和分子生物学的原理与方法，在细胞水平上进行的操作，按照人们的意志设计改造细胞的某些遗传性状，从而培育出新的生物改良品种或通过细胞培养获得自然界中难以获得的珍贵产品的新兴生物技术。 二、细胞工程发展史上的主要事件 1902年，Haherlandt预言了植物细胞的全能性； 1907，美国Harrison培养了蛙胚神经组织； 1934，荷兰温特发现生长素； 1960，英国诺丁汗大学科金教授使用酶解方法从番茄幼苗根部制备得到大量原生质体； 1972，美国卡尔森等用NaNO3为融合诱导剂，将来自不同种的烟草原生质体进行融合，获得世界上第一个体细胞杂种植株； 1977，英国胚胎工程技术，首例试管婴儿； 1997，多莉克隆羊； 2001，首例克隆猪… 第二节细胞工程的基本技术 细胞工程的分类 ①按遗传操作的对象结构层次分 根据研究对象不同 植物细胞工程 动物细胞工程 微生物细胞工程 一、细胞培养技术 1. 概念 细胞培养是将生物体内的某一块组织取出，在体外经过表面消毒处理后，用酶消化法将组织块分散成单个的细胞，然后放置在人工配制的培养基中进行培养，并使它们在体外生长繁殖的技术。 2.细胞生长所需的培养条件 必须供给足够的营养主要包括 糖、氨基酸、维生素、无机盐等； 必须保证一定的生长环境，如合适的温度、pH值以及无菌条件。 二、细胞融合技术 1.概念 细胞融合又称为体细胞杂交，由法国的Barski等于1960年首先创立。它是指在离体条件下用人工方法将两个或多个不同种的细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的过程。融合后的细胞含有两个或多个不同的细胞核，称为异核体。 细胞融合的方法 1、病毒诱导融合：仙台病毒、腺病毒等 2、化学诱导融合：PEG、聚赖氨酸等 3、物理诱导融合：电场脉冲、激光等 三、细胞重组技术 细胞重组就是在体外条件下运用一定的实验技术从活细胞中分离出各种细胞的结构或组成“部件”，再把它们在不同的细胞之间重新进行装配，从而得到新的生物活性细胞。 1. 核移植技术 核移植技术是借助显微操作仪，利用微吸管将一个细胞的细胞核吸出并移植到另一个去核的细胞中，从而可能创造出新生物品种的一项技术。 2.细胞器移植 细胞器种类很多，分离与纯化也比较容易，不过研究较多的是叶绿体和线粒体的移植。 第三节 植物细胞工程 植物组织培养技术 植物细胞培养与次生代谢产物生产 植物原生质体培养 植物原生质体融合技术 人工种子 单倍体植物的诱发与利用 体细胞遗传变异及其利用 一、植物组织培养技术 1.概念 植物细胞全能性 细胞分化和脱分化 植物细胞和组织培养 外植体 愈伤组织 形态发生 细胞全能性指植物体的每个细胞在离体条件下都具有诱导生长分化形成完整植株的潜在能力，这是因为每个细胞都具有一套完整的基因组。 细胞的全能性是植物细胞和组织培养的主要依据。 细胞分化和脱分化 细胞分化（differentiation），是指导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。 细胞脱分化(dedifferentiation)培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程。 植物细胞和组织培养 植物细胞和组织培养是指将植物的器官、组织、细胞或细胞器进行离体、无菌的培养，并重新生成细胞或植物的过程。 植物器官培养 植物细胞培养 离体胚胎培养 原生质体培养 花粉培养 外植体 植物组织培养中，作为离体培养材料的器官或组织的片段统称为外植体（explant)，如植物的根、茎、叶、花、果、穗、胚珠、胚乳、花药、花粉等均可作为外植体。 外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。 外植体选取合理与否，不仅影响培养的难易，而且有时甚至影响分化的程度和器官类型。 愈伤组织 外植体经过培养所形成的脱分化的植物细胞团称为愈伤组织。 在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。 形态发生 植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。 植物的离体体细胞胚胎发生指各种外植体、培养细胞、原生质体在培养条件下形成胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞统称为体细胞胚或胚状体）的过程。 2.植物细胞全能性的实现条件与过程 条件： 使植物细胞处于体外条件下（解除植株其余部分的影响）