碱裂解法提取质粒.ppt

碱裂解法提取质粒DNA 通过质粒的一些特性、质粒DNA的提取、测定，学习用碱变性法提取质粒DNA的方法，掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理及操作。 一、实验目的 质粒(Plasmid) ： 质粒是细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子，能稳定地独立存在于染色体外，并传递到子代，一般不整合到宿主染色体上。 在细胞内它们常以共价闭环的超螺旋形式存在。存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多。 二、实验原理 质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，具有以下特点： 易于鉴定； 在受体细胞中可以独立复制； 易于筛选； 易于导入受体细胞。 二、实验原理 高碱 细菌的细胞壁破裂，内容物释放 ①染色体DNA断裂成不同长度的线性双链DNA； ②线性双链DNA片段中的氢键断裂，双链解离变性。 ①质粒DNA不发生断裂，保持双链闭合环状； ②双链DNA并不完全分离。 高酸中和至中性 变性的染色体DNA与变性的蛋白质以及细胞碎片凝聚成网络状大分子不溶性沉淀物 质粒DNA又恢复天然构型，溶解在上清液中 纯化 RNA酶消化除去RNA，并用酚抽提法除去残留的蛋白质 SDS是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性，所以SDS处理细菌细胞后，会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒DNA以及基因组DNA从细胞中同