抗心磷脂抗体IgG和IgM双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立及应用.DOC

抗心磷脂抗体IgG和IgM双标记时间分辨荧光 免疫分析法的建立和应用 盛慧明 曹雅楠 孙 兵 薛一峰 胡志刚 基金项目：国家十一五科技支撑技划子课题（2008BAI59B02）、无锡市科技局指令性科研项目（CSE01010）资助 作者单位：200336 上海，上海交通大学医学院附属同仁医院检验科（盛慧明、曹雅楠）；中国人民解放军515医院检验科（孙兵）； 南京医科大学附属无锡人民医院检验科（薛一峰、胡志刚） 通信作者：胡志刚，电子邮箱为 jswxhzg@163.com 【摘要】 目的 建立抗心磷脂抗体（ACA）IgG和IgM双标记时间分辨荧光免疫分析方法（TRFIA）。 方法 以心磷脂抗原（含β2糖蛋白I段）包板，稀土元素Eu3+和Sm3+ 分别标记抗人IgG抗体和抗人IgM抗体，建立双标记TRFIA法并检测510例自身免疫性疾病患者(硬皮病24例、肾病综合征36例、强直性脊柱炎16例、脑梗死117例、狼疮性肾炎33例、干燥综合征63例、系统性红斑狼疮153例、类风湿性关节炎70例)血清和50例健康献血者血清，分析临床阳性率和特异性。评估双标记TRFIA法检测高、中、低值样本的精密度。将3份已知浓度血清标本作倍比稀释，计算回收率。与ELISA方法进行比对，分析比较双标记TRFIA和ELISA的一致相关性和稳定性等，统计学分析采用相关性分析。结果 双标记TRFIA法检测ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体标准曲线的R2分别为0.999、0.993，荧光计数值与样本浓度呈线性相关性。检测高、中、低值样本批内和批间变异系数均＜10.0%，ACA-IgM型抗体高、中、低3个浓度的批内CV分别为1.31%、2.82%、4.14%，批间CV分别为2.29%、4.08%、6.97%；ACA-IgG型抗体高、中、低3个浓度的批内CV分别为1.21%、3.18%、4.61%，批间CV分别为2.26%、3.93%、7.34%。采用双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的灵敏度均为0.1 U/mL，特异度均为98.00%（49/50）。ACA-IgG型抗体回收率最低为95.11%，最高为106.14%；ACA-IgM型抗体回收率最低为96.04%，最高为106.54%。硬皮病、肾病综合征、强直性脊柱炎、脑梗死、狼疮性肾炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎患者ACA-IgG型抗体阳性率依次为16.67%、2.78%、7.14%、3.42%、15.15%、4.76%、7.84%、8.57%，ACA-IgM R2抗体阳性率依次为4.17%、11.11%、14.29%、3.42%、27.27%、3.17%、8.5%、10.0%。ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体与ELISA法均成正相关（R2值分别为0.928、0.924），表明双标记TRFIA法与ELISA法检测结果的一致性较好。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型和ACA-IgG型抗体的荧光计数值分别下降14.7%和15.8%，ELISA法吸光度分别下降37.6%和33.9%，表明TRFIA法试剂盒的稳定性较好。结论 双标记TRFIA同时检测抗心磷脂IgG和IgM型抗体方法具有效率高，灵敏度高，特异性强，检测范围宽以及稳定性好，不仅降低了试剂成本也减少了人工成本，具有较高的临床应用价值，应用前景广阔。 【关键词】 抗心磷脂抗体；双标记免疫检测；时间分辨荧光免疫分析法 Detection of serum anticardiolipid antibody IgG and IgM isotypes by dual-label time-resolved fluoro-immunoassay *SHENG Huiming, CAO Ya’nan, SUN Bing, XUE Yifeng, HU Zhigang. *Department of Laboratory Medicine, Shanghai Tongren Hospital affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200336, China Corresponding author: HU Zhi-gang. Email: jswxhzg@163.com， 【Abstract】Objective To develop a novel dual-label time-resolved fluoro-immunoassay(dual-TRFIA) for detecting anticardiolipid antibody IgG and IgM isotypes simul