蜜环菌多糖对损伤性胰岛细胞分泌功能的影响及其作用机制的研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

I I 中文摘要 本论文对蜜环菌多糖进行了提取、分离和纯化，得到了两种多糖成分 AMP-1、 AMP-2，并对 AMP-1 进行了研究。研究的内容如下： 蜜环菌多糖的提取、分离和纯化：蜜环菌菌索打粹后，进行水提，经过醇沉、 浓缩合并上清，最后经过 DEAE-纤维素柱色谱（cl-1 型）分离，得到了 2 种多糖 成分 AMP-1、AMP-2。采用苯酚-硫酸法，测得 AMP-1 为均一组分，AMP-2 有 两种组分。 蜜环菌多糖对损伤性大鼠胰岛细胞（INS-1）的分泌功能的影响：通过倒置显 微镜对各实验组细胞进行了形态学观察；通过 MTT 法对四氧嘧啶损伤浓度和时间 进行了优化；用 AXN 损伤细胞，培养液中加入不同浓度的 AMP-1（50、100、200、 300、400、500mg·L-1），用 MTT 法探讨了 AMP-1 对 AXN 损伤的大鼠胰岛细胞的 活性影响；使用放免法检测不同浓度 AMP-1 对 INS-1 细胞葡萄糖刺激的胰岛素和 C 肽的分泌量。结果如下：四氧嘧啶损伤最佳浓度是 4mmol·L-1，10h；AMP-1 可 减少 AXN 对 INS-1 细胞的损伤，AMP-1 处理组的 INS-1 细胞存活率增加；AMP-1 对 AXN 损伤胰岛细胞的分泌胰岛素和 C 肽均有一定的促进作用，尤其是在葡萄 糖刺激浓度较高时（16.7 mmol·L-1），促分泌作用显著。 蜜环菌多糖对损伤性大鼠胰岛细胞（INS-1）的分泌功能的影响机制的研究： 培养大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)，以AXN损伤细胞，培养液中加入不同浓度的 AMP-1（100、300、500mg·L-1），提取各组细胞总蛋白，对其中的GLUT2进行印 迹杂交。结果表明：对照组GLUT2 蛋白的表达相对较高，而AXN损伤组表达量 明显减少，当加入一定量的AMP-1作用后GLUT2蛋白的表达量有所升高，因此, 本实验推测AMP-1 通过促进胰岛细胞GLUT2 蛋白的表达从而有助于葡萄糖转 运入胰岛β细胞,促进葡萄糖的代谢,引起胰岛细胞外Ca2 + 内流而起到促胰岛素释 放的作用。 关键词：蜜环菌菌索多糖；四氧嘧啶；胰岛细胞；胰岛素分泌；免疫印迹杂交 II II 蜜环菌多糖对损伤性胰岛细胞分泌功能的影响及作用机制的研究 Abstract By different ways of extracting and separating and purifying from the rhizomorph of Armillaria mella, two homogeneous polysaccharides ( AMP-1 and AMP-2 ) were obtained.In this paper, we did some researches in AMP-1, the main contents of the study were as follows: Extracted,separated and purified of the polysaccharides: The collected rhizomoph of Armillaria mellea was extracted by heat treatment（70°C），ethanol （95%），freezing and drying，then purified by chromatography on DEAE-52 cellulose columns, and then recorded the optical density. From the absorption we could identify that AMP-1 was made of homogeneous and AMP-2 contained two components,which could prepare us for further study. The effect of AMP-1 on INS-1 cells injured by alloxan: We observed morphology of the cell through the inverted microscope . The concentration of alloxan and time was optimized.Graded concentrations of AMP-1 (50, 100, 200,300,400,500, mg·L-1 ) were added into the culture medium of alloxan injured INS-1 cells. The survival rate