种子引发课题组实验步骤.docVIP

种子引发试验方案 （一）预试验 试验材料：郑单958 1、找到最佳引发时间 在垫有两层滤纸经过灭菌的培养皿中，分别加入0 mmol/L、0.1 mmol/L、0.25mmol/L、0.5 mmol/L、0.75 mmol/L、1.0 mmol/L 的SA溶液10mL，每个培养皿均匀摆放50粒种子（腹沟向下，种胚向上），加盖后用封口膜密封，在15℃下引发，每个浓度有3个重复，随时观察萌发时间直至每个发芽盒有一两个种子突破种皮，再此基础上向前推6~12h，计算出的时间为引发的最佳时间T。 2、找到最佳引发浓度 在垫有两层滤纸经过灭菌的培养皿中，分别加入0 mmol/L、0.1 mmol/L、0.25mmol/L、0.5 mmol/L、0.75 mmol/L、1.0 mmol/L的SA溶液10mL，每个浓度有3个重复，每个培养皿均匀摆放50粒种子（腹沟向下，种胚向上），加盖后用封口膜密封，在15℃下引发T，引发结束后，用蒸馏水将种子快速冲洗干净，滤纸吸干种子表面水分，种子放于室温下回干至原始含水量。以未进行引发处理的种子作对照。 选取籽粒饱满、均匀度一致的玉米种子进行培养，未进行引发处理的种子作对照，种子使用0．1% HgCl2消毒15 min，并用蒸馏水冲洗三次，直至冲洗干净。发芽盒中加入11mL 15%的PEG-6000 溶液。将引发和对照种子依次摆放在垫有两层滤纸经灭菌后的培养皿中。每个发芽盒50 粒种子（腹沟向下，种胚向上），每个处理设置3次重复。25℃下进行标准发芽试验，逐日记录种子根和芽的生长情况，判断在哪个浓度下生根发芽长势最好即为最佳浓度C。(实验结果见表1) 3、加速老化试验 a 样品准备：在测定老化处理之前，如果不知道带测定种子批的水分，应采用标准水分测定法检查种子批的水分。对于水分低于10%或高于14%的种子批，应在加速老化测定前将种子批的水分调节至10%-14%，然后将不同种子批的水分在相同温度和湿度条件下预先平衡含水量。 b 方案1 选取3个使用过的老化盒、盖和网架经过热消毒或用15%次氯酸钠溶液浸洗（我们用的是0.1% HgCl2）并烘干，将适量蒸馏水40mL加入老化内箱中，放上网架，确信水不会渗到网架和将要放置的种子上。称取40g玉米种子放在网架上，摊平成一层，以保证每粒种子均匀吸湿，再加上盖子（不用密封）。老化外箱设置温度45℃。将老化盒放入老化箱，老化72h。取出后立即进行称重，自然条件下风干两天，使含水量降低至13%，再做发芽试验。将老化后的种子进行标准发芽试验，3次重复，以未老化的种子做对照。（实验结果见表2） 玉米种子加速老化试验条件 内箱 外箱 老化后种子水分 种子重量（g) 箱数目 老化温度 老化时间（h) 40.0 2 45 72 26-29 方案2 热水浴老化法（Hot water aging method HW）：一定量的种子放入到小网袋内，将装有种子的网袋放入到58±1℃的水浴锅中，60min后取出晾于室温，风干到自然含水量。 邸宏,吕婷婷,刘玲玲,等.不同人工老化法测定玉米种子耐储性的比较分析[J].玉米科学,2015,23(3):71-75. （二）正式试验 试验材料：郑单958 1 种子引发处理 在垫有两层滤纸经过灭菌的培养皿中，加入浓度为0.1 mmol/L的SA溶液10mL，每个浓度有3个重复，每个培养皿均匀摆放50粒种子（腹沟向下，种胚向上），加盖后用封口膜密封，在15℃黑暗引发36h，引发结束后，用蒸馏水将种子快速冲洗三遍，滤纸吸干种子表面水分，种子放于室温下回干至原始含水量。以未进行引发处理的种子作对照 2 种子干旱胁迫下吸胀发芽 选取籽粒饱满、均匀度一致的郑单958玉米种子进行培养，未进行引发处理的种子作对照，种子使用0.1% HgCl2消毒15 min，并用蒸馏水冲洗干净将引发和对照种子依次摆放在垫有两层滤纸经灭菌后的培养皿中。培养皿中加入11mL浓度15%的PEG-6000 溶液。每个发芽盒50 粒种子（腹沟向下，种胚向上），每个处理设置3次重复。放在25℃下吸胀萌发7天，逐日记录种子根和芽的生长情况，统计发芽率，发芽势并计算发芽指数、平均发芽日数和活力指数。 3 种子吸胀期间生理生化指标测定 将引发和未引发种子依次摆放在垫有两层滤纸经灭菌后的培养皿中。引发和对照种子在培养皿中均加入11mL浓度15%的PEG-6000 溶液，引发和对照种子在培养皿中加入等量蒸馏水作为对照，每个处理设置3次重复，分别吸胀0、12、24、36、48h后，取出种子用滤纸将表面水分吸干，用刀片将引发和对照种子的种皮、胚和胚乳切割开并分别称取一定的重量，分别测定各项指标。 3.1可溶性蛋白含量的测定 一、实验目的与要求 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，