生化试剂参数.pptVIP

生化试剂各机型参数确定 目录 生化试剂主要参数及意义 生化试剂其他参数及意义 各机型生化分析仪概括介绍 各机型参数特点 生化试剂主要参数及意义 生化试剂说明书中各参数（例：脂肪酶） 项目名称 方法类型 反应方向 测定波长 测定温度 样本体积 试剂量 分析时间 校正方法 生化试剂主要参数及意义 项目名称(test name)： 常以项目的英文缩写来设置。 方法类型(assay/Method )（适用于仪器的方法）： 方法类型主要分为：终点法和动力学法 终点法 一点终点法：样本与试剂混匀一定时间后读取反应终点吸光度，如血糖氧化酶法、总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法等。 两点终点法：（又称固定时间法）样本与试剂混匀一定时间后先读取吸光度A1，延迟一定时间后读取吸光度A2，计算吸光度差值与标准比较求得结果。如肌酐苦味酸法等。可消除内源性物质干扰。 生化试剂主要参数及意义 动力学法 一级动力学法：（两点速率法）样本与试剂反应不断消耗反应物，反应速度不断减小，吸光度变化不断减小，在特定时间段内进行监测，该时间段内吸光度升高或降低与样本浓度成正比，如同型半胱氨酸、总胆汁酸等。 零级动力学法：（连续监测法，用于酶活性监测）样本与试剂反应，反应物可匀速生成某个产物，如NADH，在特定波长下吸光度均匀的增大或减小，增大或减小的速度与样本浓度呈正比。如碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶等。 生化试剂主要参数及意义 一级动力学法：（两点速率法） 生化试剂主要参数及意义 零级动力学法：（连续监测法，用于酶活性监测） 生化试剂主要参数及意义 反应方向(response direction) 正向反应（UP/INC/+）：吸光度增加。 负向反应（DOWN/DEC/-）：吸光度下降。 测定温度 30℃、37℃、25℃ 样本体积（sample volum） 一般为2-35μl ，以0.1μl步进。 试剂量（regengt volum） 一般为20-300μl ，以1μl步进。 不同机型生化分析仪的样本量及试剂量限制不同，样本与试剂可根据比例进行增大或减少。 生化试剂主要参数及意义 测定波长（wavelength）： 不同生化分析仪具备不同的波长。可选择单波长或双波长。 主波长（main wavelength/primary wavelength ） 根据待测物质在特定波长下具有最大吸收峰来选择主波长。 副波长（次波长sub wavelength/second wavelength ） 可不选择设定。副波长可消除样本溶血，血清浑浊的干扰影响，副波长与主波长越接近越好。 检测时吸光度值为主波长的吸光度减去副波长的吸光度。 生化试剂主要参数及意义 分析时间： 孵育时间（incubate time） 一点终点法的孵育时间是指样本与试剂开始到反应终点的时间；两点终点法是指第一个吸光度反应点开始到第二个吸光度点为止时间。一般为5min。 延迟时间（delay time） 加入第二反应试剂后到第一个吸光度监测点开始的时间。即样本与反应试剂（第二试剂）混匀开始至第一个吸光度选择点之间的时间。单试剂一般设置为30s，双底物反应或酶类反应一般设置为1-3min。 连续监测时间（ continuous monitoring time） 在延迟时间后的零级反应开始，监测至少4个点（3个吸光度变化值），一般为1-2min。 生化试剂主要参数及意义 校正方法（Calibration Type）： 可采用标准液（校准液）定标方式或理论K值方式获取标准曲线。 线性定标（ Linear/AB）： 两点定标，标准曲线呈直线。 非线性定标（Spline/4AB/polygonal）： 多点定标，标准曲线近似于直线。 理论K值 （Factor/MB）： 多用于连续监测法测定酶活时，无需定标曲线，根据摩尔消光系数计算得到结果。 106× V F= —————— ?×v×L 生化试剂主要参数及意义 V：反应体系总体积（ml）；v：样本体积（ml） ?：摩尔消光系数（cm2/mol） L：比色杯光径（cm）；106：将mol换算为μmol 生化试剂其他参数及意义 试剂吸光度上限、下限/试剂吸光度界限(OD Limt) 底物耗尽限额(substrate exhaust limit) 试剂吸光度线性范围(Linearity） 试剂线性范围（Technical Limit） 前区检查限(Prozone Check Limt) 方程式（Fomular） 小数位（Decimal Places） 双份界限（Duplicate Limit） 敏感性界限(Sensitivity Limit) 第一标准吸光度界限(S1 Abs.limt) 反应过程吸光度界限(A