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实时荧光定量
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PCR实验结果
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分析
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Hao Angela
Field Application Specialist
Gene Expression Division
North China
Bio-Rad Laboratories
定量PCR应用
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定量分析
•绝对定量
•相对定量
定性分析
•SNP 分析,基因扫描
• 阴阳性判定
•熔解曲线分析
应用实例-基因表达分析
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利用TaqMan技术研究ERBB2 在乳腺肿瘤
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组织标本中的表达差异
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实验设计流程
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RNA提取
Aurum Total RNA kit
RNA定量
反转录(RT)
设计qPCR实验方法
RT-qPCR实验
iScript cDNA Synthesis Kit
结果分析
材料和方法
材料和方法
• 已知在50%的乳腺肿瘤样本中,ERBB2表达异常,
因此可以作为一个检测标准
• 选用GAPDH作为内标基因
-FAM标记的ERBB2探针
-VIC标记的GAPDH探针
• 标准品(质粒)构造标准曲线
• 多重PCR反应
• 阴性对照
-无RNA对照(空白)
-无逆转录酶对照(监控基因组污染)
RNA定性及定量分析
RNA定性及定量分析
正常乳腺组织 RNA 乳癌组织 RNA
5 hr. at 7 hr. at
Intact 90°C Intact 90°C
Experion™ RNA
HighSens Chip
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