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时间相关单光子计数(TCSPC)技术原理及应用 信息工程学院 主讲人：Alen Fielding 目录 1 时间相关单光子计数（TCSPC）技术简介 2 光子计数技术 3 单光子计数器框图 4 TCSPC 实验方框图 5 TCSPC 经典工作方式和原理图 6 时间相关单光子计数技术的应用 时间相关单光子计数（TCSPC）技术简介 时间相关单光子计数技术首先由 Bollinger、Bennett、Koechlin 三人在六十年代为检测被射线激发的闪烁体发光而建立的,后来人们把它应用到荧光寿命的测量。它的优点如下：时间分辨本领好, 灵敏度高,测量精度高,动态范围大,输出数据数字化,便于计算机存贮和处理等。在近代物理、化学、生物等领域中获得了广泛的应用, 特别是在研究发光动力学方面更有它特殊用途. 光子计数技术 光子计数技术也就是光电子计数，是一种计量离散的光子脉冲的数字技术。它所探测光电流强度比光电检测器本身在室温下的热噪声水平（10-14W）还要低，用通常的直流检测方法是不能把这种湮没在噪声中的信号提取出来。光子计数方法利用弱光照射下光子探测器输出电信号自然离散的特点，采用脉冲甄别技术和数字计数技术把极其弱的信号识别并提取出来。 光电倍增管（PMT）在不同光输入时的输出 [1] (a)输入光较强时PMT输出有涨落的直流量。 (b)输入光较弱时PMT输出光电流不再是连续的。 (c)输入光极弱时PMT输出离散的脉冲。 单光子计数器框图[1] TCSPC 实验方框图[3] TCSPC 经典工作方式[1] TCSPC原理及原理图[2] 时间相关单光子计数技术的应用 荧光寿命实验 扩散光学层析 其他应用 荧光寿命实验 什么是荧光？什么是荧光寿命？ 研究荧光寿命有什么意义？ 如何测量荧光寿命？ 有什么应用？ 什么是荧光？什么是荧光寿命？ 当某种物质被一束激光激发后,该物质的分子吸收能量后从基态跃迁到某一激发态上,再以辐射跃迁的形式发出荧光回到基态.当激发停止后,分子的荧光强度降到激发时最大强度的1/e所需的时间称为荧光寿命，它表示粒子在激发态存在的平均时间,通常称为激发态的荧光寿命。 研究荧光寿命有什么意义？ 荧光物质的荧光寿命不仅与自身的结构而且与其所处微环境的极性、粘度等条件有关，因此通过荧光寿命测定可以直接了解所研究体系发生的变化。荧光现象多发生在纳秒级，这正好是分子运动所发生的时间尺度，因此利用荧光技术可以 “看” 到许多复杂的分子间作用过程，例如超分子体系中分子间的簇集、固液界面上吸附态高分子的构象重排、蛋白质高级结构的变化等[4]。 如何测量荧光寿命？ 时间相关单光子法 调相法 闪频法 有单色仪的荧光寿命光谱仪 计算方法[5] 处于激发态的荧光分子在退激发到基态的过程中发射荧光释放能量，激发态荧光团荧光强度的衰减用数学式表达为单指数函数： 荧光寿命原理图 多光谱荧光寿命实验[2] 通常情况下为了避免光漂白效应，总的激光剂量不可能太大，而且研究对象的荧光也可能发生动态变化，此外，作为一种检测、诊断或治疗手法应用到病人身上，激光功率还受到激光安全方面的限制。因此用单色仪进行扫描获得时间分辨荧光常常是不太可取的方法，此时要记录多个波段的衰减曲线。 双色分光镜多波长探测侧系统 多波长荧光实验 对若丹明6G和荧光素的混合物，同时记录得到的荧光强度随时间和波长变化的曲线 时间相关单光子技术测荧光寿命的优缺点 优点：在于灵敏度高、 测定结果准确、 系统误差小， 是目前最流行的荧光寿命测定方法。 缺点：但是这种方法所用仪器结构复杂、 价格昂贵、 而且测定速度慢， 无法满足某些特殊体系荧光寿命测定的要求。 应用 由于荧光分子与溶剂的相互作用、构象变化以及与蛋白、缩氨酸和脂质等的不同结合状态而引起的荧光寿命变化。 荧光分子的寿命随其周围环境的折射率而变化。 压力对荧光寿命的影响在。 电子和质子传递与荧光寿命的关系。 光动力学治疗的相关研究. 金属纳米颗粒结合后，荧光染料的辐射衰减速率和光稳定性得到增强。 扩散光学层析成像（DOT） 什么是扩散光学层析成像？ 基本原理是什么？ 主要应用有那些？ 优点 什么是扩散光学层析成像 扩散光学层析成(DiffuseOpticalTomography,DOT)就是利用光与生物组织生理指标密切而灵敏的联系,通过对组织体穿透能力较强的近红外光照射组织体,由光电探测阵列采集漫射(扩散)光并取相关算法反推光学参数空间分布进而反映关联生理变化。 基本原理 光子入射到生物组织中，其经历伴随有反射、吸收、散射和透射等过程。 光子在组织中的传输大多是基于传输理论。在传输理论中，主要采用吸收系数、散射