淋巴细胞的分离和功能检测.PPT

ELISA测定各类免疫球蛋白 方法 1. 包板：96孔板用浓度为10μg/ml的特异性单抗包被。盖上盖板，37C°，5％CO2，2h，或4C°过夜。常规洗板，封闭。 2. 上样：每孔内加入1:10或1:20 稀释的细胞培养上清液100μl。阳性对照为标准品，阴性对照为培养液。每试验设2复本。室温培育2h，或4C°过夜。 3. 加酶标二抗：每孔加100μl碱性磷酸酶标记的羊抗人IgM或IgG或IgA二抗。室温培育2h，或4C°过夜。 4. 显色：洗板，每孔加100μl底物（p－nitrophenyl phosphate）。 5. 自动酶标仪读数，从标准曲线读出抗体浓度。 B细胞产生抗体能力的测定 ELISA测定各类免疫球蛋白 评价 ELISA法灵敏、简单、快速、特异性高、重复性好，是测定上清和体液中Ig的首选方法。碱性磷酸酶标记的二抗显色明显，不必用碱中止反应，尤其适用于测定体外产生的抗体。 应用实践 ELISA可测定各种体液中的抗体，其结果反映被检个体B细胞功能。测定免疫球蛋白各种亚类的水平有助于鉴定免疫缺陷病。 B细胞产生抗体能力的测定 (二)抗体形成细胞测定 反向溶血空斑形成实验（reversed hemolytic plaque assay，RHPA ） 待检人的PBMC或组织来源的淋巴细胞（如扁桃体、脾细胞等） 待检人的P