面包烘烤品质基因1Dx5在冬小麦新冬26中的遗传转化及后代检测-植物学专业毕业论文.docxVIP

新疆师范大学学位论文原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个 人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和 集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人 承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 学位论文作者完全了解新疆师范大学有关保留和使用学位论文的规定，即： 研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属新疆师范大学。学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查 阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩 印或其它复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后遵守此规定） 保密论文注释：本学位论文属于保密在 年解密后适用本授权书。 非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围，适用本授权书。 学位论文全文电子版同意提交后可在校园网上发布，供校内师生浏览。 本人签名： 日期： 导师签名： 日期： I I PAGE PAGE VI 中文摘要 本文以新疆主栽耐盐冬小麦（Triticun aestivum L）品种新冬-26 作为研究对 象，采用基因工程手段，通过制备面包品质主效基因 1Dx5 的线性核心片段，采 用花粉管通道方法实现线性 1Dx5 核心片段在新冬-26 中遗传转化，获得转基因 小麦植株；并利用 SDS手段和 Multiplex-PCR 技术检测和分析外源基因 在转基因后代中的遗传表达情况，以期获得安全型的强筋与耐盐并举的转基因 小麦株系。这不仅为保障粮食安全提供了新型的种质资源，进而加快了干旱区 高品质小麦的生产步伐，同时对利用现代分子生物学技术手段改良我国小麦加 工品质、培育资源高效型农作物等都具有重大的理论价值和实践意义。 主要研究结果如下： （1）小麦及其近缘种 1Dx 亚基基因的比较分析：利用生物信息学手段，对 所选 1Dx 型亚基的核酸、蛋白质一、二级结构进行比较和分析。结果显示：在 核酸的水平上，其相似性高达 96.58%，存在有 90 个 SNPs；SNPs 造成氨基酸 水平上出现 53 个氨基酸的替换；在氨基酸水平上，其相似性高达 96.74%，并 存在 7 处氨基酸肽段的缺失/插入；在预测的蛋白质二级结构水平上，相似性高 达 97.71%，其中 SNPs 可能造成四处二级结构单元的改变，同时重复序列的插 入和缺失影响二级结构中无规卷曲的长短，其可能是影响蛋白质亚基的生物学 功能的主要因素。通过分析各基因在 DNA 和蛋白质水平上存在的差异和联系， 探究各基因在功能上差异的原因，并在一定程度上揭示各基因在分子结构、生 物学功能和物种进化三者之间的关系，为后期外源基因的检测奠定理论基础和 提供强有力的技术方案。 （2）外源基因的遗传转化和检测：以小麦品种新冬-26(Null,7+8,2+12)为实 验材料，采用花粉管通道法将线性1Dx5基因核心片段和pHMW1Dx5分别导入到 受体材料中，利用蛋白质检测手段，分析转基因小麦T0代HMW-GS的组成情况。 结果显示，线性1Dx5基因转基因小麦T0代籽粒中有5条高分子量麦谷蛋白亚基条 带，分别是1Dx2、1Bx7+1By8和1Dy12，一条新的蛋白质亚基-BandX，迁移率 快于1Dx5，其频率为0.2%；pHMW1Dx5转基因小麦T0代籽粒也产生了新蛋白质 条带，其迁移率慢于1Dx2，其频率为0.15%。 （3）pHMW1Dx5 转基因小麦后代中外源基因的检测和分析：结果显示， 采用 PCR 技术，在转基因 T0 代植株中扩增出 1Dx5 基因的特异片段大小为 450 bp，表明外源基因已整合到受体基因组中；SDS分析 T1 代籽粒外源基因 的表达，表明外源基因插入受体基因组中并表达，引起了转基因 T1 代籽粒中 HMW-GS 组成的变化，获得了 pHMW1Dx5 转基因小麦株系。本实验验证了借 助花粉管通道法转化外源基因的遗传转化策略是可行的，并使得外源基因在转 基因后代植株中遗传表达，为线性基因片段直接转化体系的建立奠定了坚实的 基础。 （4）线性 1Dx5 转基因小麦后代中外源基因的检测和分析：通过建立 Multiplex PCR 体系和运用 SDS技术对转 1Dx5 基因小麦后代进行了检测 和分析。结果显示，Multiplex-PCR 能够扩增出转基因 T0 代材料中 1Dx5 基因的 特征片段，大小为 320 bp 和 343 bp，表明外源基因已整合到受体基因组中； SDS检测到新蛋白质亚基 X，表明外源基因的插入引起了转基因 T1 代籽 粒中 HMW-GS 组成的变化，获