糖尿病肾病 湘雅医院讲座.pptxVIP

中南大学湘雅医院肾内科周巧玲背 景糖尿病的主要并发症冠心病周围神经病变视网膜病变糖尿病肾病背 景糖尿病肾病是糖尿病最严重的并发症之一最近研究显示，糖尿病肾病的发病率呈明显增加糖尿病肾病的发病机制目前并未完全明确2型糖尿病肾病的自然病程 临床2型糖尿病 功能改变*结构改变+血压升高微量白蛋白尿临床蛋白尿血肌酐升高 ESRD 心血管死亡出现糖尿病 5 10 20 30年*肾脏血流动力学改变,肾小球滤过+肾小球基底膜增厚↑,系膜扩张↑ ,微血管改变+/- ESRD的发病率及其病因糖尿病发病率（国内）1980年（14省市30万人口）0.67％1994年（19省市21.35万人口）2.51％1996年（11省市42.75万人口）3.21％预计2025年 全球3亿糖代谢异常所致的DN的发生发展的因素多元醇代谢通路的激活糖基化终末产物的产生葡萄糖转运蛋白的作用甘油二酯（DAG）－蛋白激酶C（PKC）信号传导通路激活 目前关于糖尿病肾病发病机制的研究三高：高滤过、高灌注、高跨膜压代谢的改变生长因子(TGF-β,IL-6, PDGF)细胞外基质（ECM）合成增加遗传因素蛋白激酶C(PKC) 丝裂原活化蛋白 (MAP)糖基化终末产物 (AGE )HyperglycaemiaDAG(esp. PKCζ)Diabetologia(2001)44:659~673Atypical aPKCsζwidespreadProtein Kinase C IsoformsDiabetologia(2001)44:659~673HyperglycaemiaPKCζactivation??TIMP and? MMPECM accumulationDIABETIC NEPHROPATHY稳 态 基质降解基质合成糖尿病肾病的机制研究合成降解细胞外基质糖尿病中促进 ECM 积聚的因素高糖TGF-β？基质蛋白MMP 活化MMP sTIMP s纤溶酶原活化物纤溶酶的活性TGF-β基质的降解细胞外基质积聚Cellular and Molecular Biology 45（1），123-135参与细胞基质降解的四种酶天门冬氨酸酶半胱氨酸酶丝氨酸酶基质金属蛋白酶(MMPs)纤维化前状态基质降解金属蛋白酶抑制剂纤溶酶原激活剂抑制剂基质合成正常间质基质蛋白正常小管基底膜蛋白异常基质蛋白蛋白多糖/糖蛋白多糖糖基化作用,氧化作用.转谷氨酰胺酶交叉联系基质 稳定高 糖纤溶酶 表 达活 化活 性基 质 降 解基 质 积 聚高糖对MMP活性影响简图Kidney international ,vol.58,suppl.77,pp.s81-87 肾小球系膜细胞MMP的主要类型 MMP类型名称 酶作用底物间质胶原酶MMP-1,MMP-8 , MMP-13II和 III型胶原IV型胶原酶或明胶酶MMP-2, MMP-9IV,V和 VI型胶原、纤连蛋白、明胶基质降解素MMP-3,MMP-7, MMP-10蛋白多糖，laminin，纤连蛋白，III,IV,V型胶原膜型金属蛋白酶MT1-MMPMMP-2 Kidney international ,vol.58,suppl.77,pp.s81-87Ⅰ期高滤过，肾小球体积增大GFR?MAP(-)BP(-)肾小球肥大，GBM和系膜正常Ⅱ期正常白蛋白尿?/(-)应激后??/(-)GBM增厚，MC增殖Ⅲ期微量白蛋白尿大致(-)??GBM增厚，ECM?Ⅳ期大量白蛋白尿??200ug/24h??GBM增厚，ECM??，小球荒废Ⅴ期ESRD?? 小球荒废面????硬化（广泛）糖尿病肾病临床病理分期正常肾小球糖尿病肾脏KW 结节局灶性节段性肾小球硬化终末期肾病（硬化）高糖环境下正常人类肾小球系膜细胞中MMP表达及肝素对其表达的影响材料与方法细胞培养正常人类肾小球系膜细胞 (NHMC)培养基(5mM DMEM,25mM DMEM)10%小牛血清(10%FCS)青霉素 (100u/ml), 链霉素 (100mg/ml)肝素培养调节:37℃,5%CO2, 95% 空气材料与方法细胞增殖测定 WST-1 法 (波长 450/600nm)Western blot 分析 抗体1: MMP1,2,3,9 抗体2:羊抗鼠 IgG (辣根过氧化物酶) 结 果高糖对 NHMC 增殖的影响 结 果肝素对 NHMC 增殖的影响 （LG）结 果肝素对 NHMC 增殖的影响 （HG） 52 kd 72 kd 92 kd 57 kda b c d a b c d 结 果