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多肽固相合成中的支持体问题幸 杜雨苍 (中国科学院上海生物化学研究所) 自从1954年第一次台成具有生物瑶性的多肽一催 产紊“1，至今将近20年中，随着医学事业及分子生物 r毒浒等州f轸姗：l 乩 l”“： {A一 学研究的需要，多肽台成有了飞跃的发展。一系列的 多肽艮蛋白质，如促肾上腺皮质激素Ⅲ(39肽)，胰岛 M ， + 商 素”1(两条肽链共51个氨基酸残基)，增血糖素【”(e9 肚)，请血钙激素“1(32肽)和它们的类似物以及一些 ■一A+々 蛋白质的较大片段，如棱糖拔酸酶T，的氨端{7肤等均 已合成“’。这些产物都是用发展较早的所谓经典法台 成的，它的特点是反应物在有机溶剂中均相进行缩 合。随着呔链的延长，反应物在有机溶荆中的溶解度 将显著下降，它们的有效墙合和最终产物的分离提纯 都发生很大围难。近年来虽然在保护基及精台剂的 选用和分离方法的革新等方面取得了很大的发展，但 目前甩经典法合成大肽仍停留在四、五十肽水平。 Hirschmann在1969年用均相法合成核糖核酸酶s一蛋 每轮操作延话一 白”’(104肽)的报导中，虽利用尽量减少侧链保护基 十氨基随残基 而增加肽段溶解度的新选径，但最终只能得到具有相 当于几个散克的产物，很堆进一步提纯鉴定。 针对上述困难，Metrifleld等[11在1962年提出了 所谓固相合成。它的流程如图1所示，先将反应物，酰 圈I周相台成多脒示意 基化氨基酸-(M-A-)通过其羧基与固相支持体(S)， 说明：M，代表氨基保护基，图中为叔丁氧攘基(Boc一) 共价形成醋键(M·A-一(s))，脱去其保护基M后暴露 亦可用，船硝基硫酚基(NPS)或联苯异丙鲁壤基 (Dpoc)等。 出氨基，再与另一反应成分：酰化氨基酸，(M-A：)厦 缩台剂，一般用二环己碳二亚胺(DCCI)。亦可用 缩合剂在有机溶剂内进行不均相缩合，形成M·A：·A．· N一乙氧装基，2一乙氧基，l，2-二氢哇咻(EFa3Q) (s)。如此再脱去保护基M后，即可进行另一轮缩台。 等^，代表氨基酸残基，注脚表示昧的按端顺序位 如此依次从N一端递加，形成大肽。每一轮反应包括： 置R，代表氨基酸侧链基匝． (s)代表支持物． 脱保护基、中和及结合三步，过置的反应物M·A。及缩 台剂均可随着多次洗涤支持体而去除。初看起来，这 ‘奉文曾在中国科学院高分子学术交流会(1972年12月) 是很理想的合成大呔的方{击，而且还能自动化，适宜于 上报告，经作者整理后于1973年3月收到c 万方数据 3S(总358)· 化 拳 通 报 975迮 工业生产。然而这方法存在着固有的严重缺点，即如 最早应用固相_：击台成55肽(铗氧还蛋白)的德国学 果每步缩台不能定量完成，则每次产生的短缺肽段在 者Bayer首先观察到随着树脂上呔链的延长，自由氨基 上百次反应中太量积累，将使最终产物很难占上大量极 总量会逐步减少”1，进一步的研究表明：由于每步缩 为相似的蟊Ⅱ产物中分离出来。虽然近年来出现了应用 台不完全而在最后产物中混入了大量的“错误噘序魄” 此接合成大瞄的铁氧还蛋白“1(Ferredoxln，55呔)、是造成产品不纯的主要骧困“。综台近年来许多作者 牛胰岛素c”¨及棱糖棱酸酶A(124呔)”曲1的报导，但的报告，固相法产物中可包台：