微生物学显微镜直接计数法.pptVIP

实验三、微生物数量的测定 一、实验目的： 掌握使用血球计数板进行微生物显微镜直接计数的方法 了解微生物数量测量的几种方法、原理及其应用 二、实验原理 常用的微生物细胞数目的检测法 血球计数板法 平板菌落计数法 干重法 比浊法等 干重法 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来，然后烘干至恒重(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10%—20%。 注：该法适合菌浓度较高的样品。 比浊法 在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与吸光值成正比，菌数越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。该法适合测定大量的细胞。 显微镜直接计数法 利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一种微生物计数法 优点：直观、快速 缺点：误差较大，不适合细菌计数（太小） 其原理与计数板的构造有关 每块计数板上有两个计数室 （正方形），盖上盖玻片后容积是一定的（0.1mm3），深为0.1mm，边长为1mm，其上面有精确的刻度。 我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总菌数。如图： 计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B 1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B =50,000A×B个 特别注意 血球计数板均有编号，一人一个，务必小心使用，若损坏，需原价赔偿或赔偿原物！ * * 其刻度一般有两种规格 16个中方格，每个中方格分25个小格 16×25 25个中方格，每个中方格分16个小格 25×16 计数室 5个方格的总菌数 稀释倍数 三 实验器材 1.菌种 酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液(已稀释100倍) 2.器具 显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。 四 实验方法 1.检查计数板 检查计数板是否有破损。 2.镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。 3．加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。 4.显微镜计数 静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数 5.清洗血球计数板 计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。 注意事项 1、加样时先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生； 2、菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。 3、计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的； 4、如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，作为两个菌体计算； 5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用水柱清洗，直到洗净为止。 6、一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。