抗氧化剂对冷冻人颗粒脂肪组织的保护作用-临床医学(外科学)专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 抗氧化剂对冷冻人颗粒脂肪组织的保护作用 中文摘要 背景：自体脂肪是一种理想的填充材料，几乎可用于全身各个部位的软组织 缺损治疗，在整形外科中广泛应用。有研究报道，采用取自上臂小块脂肪组织游 离移植填充下眶缘软组织缺损获得了良好的美容效果，认为抽取自体脂肪进行注 射移植这种方法是值得推广的。然而目前填充移植后保存的脂肪组织体积最终只 有注射时的20-30％左右。为了达到满意的填充效果，临床上常常需要进行再次 或者多次填充移植。反复的脂肪抽取操作既增加了医生的工作量，又增加了患者 为取材而吸脂的手术痛苦和手术风险，并造成较高的费用。在此背景下如能通过 一次吸脂手术获得足够的脂肪组织，同时将获取的脂肪进行体外长期冷冻储存， 在需要时复温即可使用，是广大医生和患者的迫切愿望，同时也具有重要的临床 应用价值和经济价值，冷冻过程最关键的是冷冻保护剂的选用。但目前国内外关 于人颗粒脂肪组织冷冻保护剂的研究尚少，用于冻存其他细胞或组织时的冷冻保 护剂是否可保持冷冻保存脂肪组织中细胞的完整结构和活力的研究还鲜见报道。 通常认为在冷冻保存过程中细胞损伤主要来自两方面：一是降温时细胞内生成粗 大的树枝状冰晶直接破坏细胞结构；另一方面则是细胞在降温过程中氧化应激产 生过多过氧化物，使细胞活力受损，加速了细胞的凋亡。 目的：本次研究在基础冻存液中添加目前临床较常使用的抗氧化剂来进行人 颗粒脂肪组织的冻存，观察复温后的细胞结构代谢、及细胞活性等方面的变化， 初步探讨添加抗氧化剂是否更有利于人颗粒脂肪组织的冻存，为自体脂肪注射移 植实现―一次冻存，长期使用‖的目标和提高冻存后人颗粒脂肪组织移植的成活 率，减少患者的痛苦和医生的工作量，提供相关理论支持和基础实验依据。 方法：以配制渗透性玻璃化冷冻保护剂（生理盐水+8%二甲基亚砜）为基础 液，分别以不同浓度的抗氧化剂超氧化物歧化酶（100, 200, 400, 600 IU/mL）， 谷胱甘肽（1, 5, 10, 15 mmol/L）和生育酚（维生素 E，1, 1.5, 2, 2.5 mg/mL）配制 冻存液；再与抽取获得经分离提纯后的人颗粒脂肪组织混合均匀，置于-4℃冰箱 I 中冻存2个月后取出；复温后通过组织石蜡包埋切片 HE 染色观察细胞结构是否 完整，组织冰冻切片油红 O 染色观察脂肪细胞中脂滴形态，以及 ROS 检测盒荧 光染色流式细胞术分析细胞内 ROS 含量，碘化丙锭（PI）染色流式细胞术分析 细胞凋亡，观察分析添加抗氧化剂冻存后人颗粒脂肪组织中细胞的基本结构、代 谢及活力改变。 结果: HE 染色显示，经单纯 PS+8%DMSO 基础冻存液冻存的人颗粒脂肪组 织复温后组织结构不均匀，镜下可见大片囊样脂池和坏死区。而 100-600 IU/mL SOD（或 1-15 mmol/L GSH 或 1-2.5 mg/mL VE）+PS+8%DMSO 冻存组复温后脂 肪 组 织 结 构 较 均 匀 ， 大 的 囊 样 脂 池 形 成 较 少 。 油 红 O 染 色 显 示 ， 经 单 纯 PS+8%DMSO 基础冻存液冻存的脂肪组织复温后脂肪组织中脂滴大部分破裂， 少见蓝色胞核，而 100-600 IU/mL SOD（或 1-15 mmol/L GSH 或 1-2.5 mg/mL VE） +PS+8%DMSO 冻存的可见部分蓝染胞核，红色脂滴，但形态欠佳。ROS 检测盒 荧光标记流式细胞仪分析数据成图显示，单纯 PS+8%DMSO 基础冻存液组颗粒 脂肪组织的荧光含量峰值最高，多于其他实验组（P0.05）。以不同浓度 SOD （或 GSH 或 VE）+PS+8%DMSO 为冷冻保护剂冻存颗粒脂肪组织，8 周后复温， 通过 PI 单染的流式细胞术测定细胞凋亡，结果显示，SOD+PS+8%DMSO 冻存组 凋亡细胞曲线峰均低于单纯 PS+8%DMSO 基础冻存液冻存组（P0.05）。 结论：1. 用常规冻存液含 8%二甲基亚砜生理盐水在-4℃冻存人颗粒脂肪组 织 2 个月后解冻复温，脂肪组织在结构完整性、细胞内脂滴含量明显下降，细胞 凋亡水平增加。2. 在常规冻存液添加不同浓度的抗氧化剂超氧化物歧化酶、还 原性谷胱甘肽或维生素 E 后，在-4℃冻存人颗粒脂肪组织 2 个月后解冻复温，脂 肪组织的结构完整性和细胞内脂滴含量有不同程度的改善，细胞内活性氧水平和 细胞凋亡水平明显降低。3. 在本次实验浓度范围下，超氧化物歧化酶、还原性 谷胱甘肽或维生素 E 保护细胞的冻融损伤呈剂量效应依赖性。 关 键 词 ： 抗氧化剂 ， 人 颗 粒 脂 肪 组 织 ， 冷 冻 保 存 ， 氧 化 应 激 ， 凋亡 II The Protective Effects of Antioxidan