乳品中抗生素的检测方法.DOCVIP

乳品中抗生素的检测方法 乳品中抗生素的检测方法王庆忠???蒲彪（四川农业大学信息与工程技术学院，四川省雅安市??625014）?摘要：本文对检测抗生素的3种主要方法：微生物法、酶法和色谱法的设计原理和筛选策略进行了分析。论述了BSDA?、Charm?Farm、Charm?Cowside、Penzyme、Delvotest?P、CITE?Probe、Lactam?Test?Kit等检测方法的研究历史。比较和分析了多种方法的检测敏感性、特异性和影响检测的可能因素。最后就如何提高我国乳品的抗生素检测水平，提出了建议措施。?关键词：抗生素?检测?原理?筛选?BSDA?试剂盒??????经多年的实践，人们认识到抗生素可以增强牲畜抗病能力、提高养殖业产投比。但过量使用，将降低畜牧产品品质，影响乳品发酵。而含有抗生素残留的动物性产品，进入人类食物链，会使体内菌株产生抗生素抗性，扰乱机体内环境平衡，菌群失调而不利于健康；也会对易感人群产生过敏反应、激素障碍变态反应。因此，FAO及WHO早在1969年就提出应规定各种动物性食品中的抗生素残留允许标准，WHO于1979年规定原料奶及消毒牛奶中不得有抗生素。近年来，国内对奶制品中的抗生素残留也非常关注，无抗奶（Antibiotic-Free?Milk）的生产和消费已成为大势所趋。但我们对奶制品中抗生素的检测缺乏必要的研究，检测技术还十分落后。本文旨在对抗生素的检测方法进行总结，为在我国开展相关工作奠定基础。?1?检测原理传统检验方法是基于抗生素残留对微生物生长的抑制，以扩散过程或浑浊度为基础。抗生素浓度越高，微生物的生长受抑制程度越大，菌落越小。STOP法（当场棉拭检验）以枯草芽孢杆菌（ATCC6633）32℃下培养16-18小时测定抗生素；CAST法（兽崽抗生素和磺胺制剂实验）则是接种巨大芽孢杆菌（ATCC9885）在44℃下培养；而BSDA法（B.stearothermophilis?tablet?Disc?Assay，嗜热脂肪芽孢杆菌圆盘检验法）则采用嗜热脂肪芽孢杆菌。免疫检验法是对抗抗生素抗体的检验。基于抗生素刺激动物产生相应的应急反应，从而形成抗体。通过抗原-抗体的特异性结合，确定抗生素含量。该方法的引申是通过细胞质表皮因子（Surface?Plasmon?Resonance，SPR）对抗生素的特异结合，测定相应的酶活性或基质的电流变化，从而推算抗生素浓度，以实现自动化检测。使用高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）对抗生素进行定量、定性的测定，主要是基于它们测定痕量物质的优越性。Andrew[1]总结了6家公司8种检测试剂盒的检测原理，见表1。可看出有一半检测试剂盒是采用抑制微生物生长的原理而设计的。?表1???不同检测试剂盒工作原理试剂盒?生产厂家?分析原理Charm?Farm?Charm?Science,?Inc.?(Malden,MA)?抑制微生物生长Charm?Cowside?Charm?Science,?Inc.?青霉素竞争性吸附展示Delvotest?P?Gist-brocade?Food?Ingredients,?Inc.?抑制微生物生长Penzyme?SmithKline?Beecham?Animal?Health?酶反应CITE?Probe?ICEXX?Laboratories,?Inc.?抗原-抗体吸附Lactam?Test?Kit?Idetek,?Inc.?竞争性酶联免疫Valio?T101?Valio?Finland,?Research?and?Development?Centre?抑制微生物生长Charm?BSDA?Charm?Science,?Inc.??抑制微生物生长?2?检测方法筛选策略FDA兽医学中心规定，检测方法敏感性要强，特异性要高。某项方法如要成为法定方法，其检测的最低限值应该在95%置信度的情况下，检测FDA规定的安全浓度或允许浓度（safe?or?tolerance?level，欧盟称为MRL，Maximum?Residue?Limits）可能性要大于90%。可以采取以下策略筛选和评价检测方法[2]：第一步，初步评价敏感性和特异性。测定特异性时，选择绝对不含抗生素的样品，其中体细胞数量（Somatic?Cell?Count，SCC）要106/ml，结果为阴性。测定敏感性时，则在奶样中添加MRL水平的抗生素，结果为阳性。第二步，测定最底检测限。使用30-60个样本，其中的抗生素含量一般间于20%MRL到2倍MRL水平，绘制检测方法对不同抗生素的标准曲线。第三步，评价影响因素。采用含有内毒素，且SCC含量间于2×106-6×106个/ml的奶样，特异性要达到90%以上。第四步，现场检验。各