软枣猕猴桃组培快繁技术规程-黑龙江质量技术监督局.DOCVIP

DB××/T ××××—×××× PAGE PAGE 1 黑龙江省市场监督管理局 发 布2019 黑龙江省市场监督管理局 发 布 2019-××-××实施 2019-××-××发布 软枣猕猴桃组培快繁育苗技术规程 DB23/T ×××× —2019 DB23 黑龙江省地方标准 ICS 65.020.40 B 61 DB23/T ×××× —2019 PAGE 3 前 言 本标准依据GB/T 1.1—2009的编写规则起草。 本标准由黑龙江省林业和草原局提出并归口。 本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省林业监测规划院。 本标准主要起草人：田新华、李京、周伟政、张玲、卢慧颖、李艳霞、张妍妍、张建瑛、姜天瑞、温爱亭、李念森、黄俊杰、毛洪波、于腊梅、于晓杰、韩贤波、白吉福、徐英华。 软枣猕猴桃组培快繁育苗技术规程 1 范围 本标准规定了软枣猕猴桃（Actinidia arguta Planeh.）组培快繁育苗技术的仪器设备、环境和设备消毒、培养基制备、外植体培养、炼苗与移栽、生产档案。 本标准适用于软枣猕猴桃组培快繁育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 DB23/T 1589 蓝靛果种苗组培快繁技术规程 3 仪器设备 应符合DB23/T 1589的规定。 4 环境和设备消毒 4.1 接种室消毒 接种前用紫外灯照射30min。 4.2 培养室消毒 每周用臭氧消毒40min。 4.3 超净工作台的消毒 接种前用紫外灯照射30min并用70％ 酒精擦拭台面，定期清洗超净工作台过滤膜。 4.4 接种器具的消毒 使用前将枪式镊子、解剖剪、培养皿、解剖刀进行高温蒸汽消毒；接种过程中采用酒精灯灼烧消毒。 5 培养基制备 5.1 母液配制 按照LY/T 1882的规定执行。 5.2 培养基配制 按照LY/T 1882的规定执行。 诱导培养基：MS培养基+ 6-BA 0.5 mg/L+ZT 1.0 mg/L；继代增殖培养基：MS培养基+6-BA 1.0 mg/L+ZT 0.5 mg/L；生根培养基：MS培养基+IBA 0.2 mg/L。 5.3 培养基灭菌 采用高压蒸汽灭菌，在压力0.105 MPa、温度121 ℃ 条件下灭菌20 min。锅内的灭菌物以不超过锅容量的 5.4 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下宜在7d 内使用，2℃～4℃ 条件下14d 内使用。培养基应保存于洁净环境中，避免阳光直射 6 外植体培养 6.1 外植体的选择 选择生长健壮、无病的植株作为采样母株，剪取当年生的半木质化的茎段作为外植体，采样时间宜选择晴天或露水干后。 6.2 外植体灭菌 先将外植体用洗涤剂作表面清洗，再将外植体用流水冲洗30min 后，将外植体放入消毒瓶中。把装有外植体的消毒瓶放入超净工作台，打开消毒瓶倒入0.1% 升汞并摇晃，浸泡消毒3min 取出，用无菌水冲洗5次；再用无菌水浸泡40min，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。 6.3 外植体接种与诱导培养 将培养瓶的封口膜取下，瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒。枪式镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，将表面消毒后的外植体用手术剪刀剪去两端，剪取长约1.0 cm左右的带有单个腋芽的茎段接种于诱导培养基。每个培养瓶放3个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期。培养35 6.4 继代增殖培养 外植体经诱导培养生成丛生芽，转接至继代增殖培养基中培养。培养35d 后再进行继代增殖培养。 6.5 生根培养 选取培养瓶中长度1.5 cm ～2.0 cm生长健壮的芽接种至生根培养基中，组培苗生长过程中在基部会出现浅绿色嫩根，培养35 d后平均生根数3条以上，根长在 6.6 组培苗培养条件 培养室的温度控制在24±2 ℃ ，相对空气湿度控制在70% ～80% ，光照强度为2000 Lux ～3000 Lux，光照时间为12 h 7 炼苗与移栽 7.1 组培苗炼苗 将装组培苗的培养瓶从培养架上轻轻取下，迅速转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20℃～25 封口炼苗后打开瓶口，向瓶内注入超过培养基表面0.5cm 高的自来水，温度控制在20℃～25℃， 7.2 移栽 用手指或镊子轻轻取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，速蘸0.5% 高锰酸钾溶液消毒，移栽至装有黑壤土和粗河沙（混合比例为2：1）的混合基质的育苗盘中