硫氧还蛋白-1对缺血再灌注皮瓣的保护作用及分子机制研究-外科学（整形）专业毕业论文.docxVIP

中国医学科学院北京协和医学院博士学位论文目 中国医学科学院北京协和医学院博士学位论文 目 录 论文摘要 ·1 Abstract 3 引 言 ·7 第一部分缺血再灌注皮瓣中硫氧还蛋白．1表达情况与细胞凋亡程度的关系研究1 1 1、材料与方法 1 l 2、结果 14 3、讨论 1 6 4、小结 18 第二部分硫氧还蛋白．1对缺氧环境下角质形成细胞的保护作用和分子机制的实验 研究 19 1、材料与方法 。 1 9 2、结果 23 3、{寸论 25 4、小结 28 第三部分硫氧还蛋白．1对缺血再灌注皮瓣保护作用和分子机制的体内实验研究29 l、材料与方法 ．．29 2、结果 33 3、{寸论 40 4、／J、结 44 全文总结 45 试剂耗材仪器 47 文献综述：皮瓣缺血再灌注损伤的研究进展 ··51 参考文献 65 英文缩略词表 81 附录：己发表研究论文汇总及学术交流情况 一83 致 谢 ·87 独创性声明 88 学位论文版权使用授权书 88 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院博士学位论文论文摘要 中国医学科学院北京协和医学院博士学位论文 论文摘要 目的： 皮瓣缺血再灌注损伤是游离皮瓣移植不可避免的并发症，也是术后组织血运障 碍、水肿以及坏死等并发症发生的主要原因。目前研究认为皮瓣缺血再灌注损伤与 组织内活性氧物质爆发而导致的广泛的氧化应激损伤和细胞凋亡密切相关。硫氧还 蛋白(Thioredoxin，Trx)是广泛分布于机体各组织细胞中的生命基础蛋白，对细胞 内氧化还原平衡的维持和细胞凋亡分子通路的调控具有重要意义。我们的前期研究 发现trxl基因与皮肤组织对缺氧的耐受能力有关。因此，本研究通过临床组织标本 检测、体外细胞实验和动物体内实验探讨和研究Trx．1对皮瓣缺血再灌注损伤的保 护作用、分子机制、预后意义和治疗价值。 方法： 1、对10名接受游离皮瓣移植手术的患者采取缺血再灌注皮瓣组织标本，以自身正 常全层皮肤组织作对照，分别应用TUNEL染色和免疫组织化学染色检测临床 组织标本中细胞凋亡程度和Trx．1表达量，并通过线性回归分析二者之间的相 关关系。 2、构建CoCh诱导的角质形成细胞(HaCAT)化学缺氧模型，应用Wenstem blot 检测和分析缺氧环境下细胞凋亡相关蛋白的表达情况和重组人Trx．1蛋白对缺 氧细胞的保护作用机制。 3、构建小鼠缺血再灌注皮瓣模型，观察再灌注7日内皮瓣存活率的差异，并应用 HE染色、免疫组织化学染色、TUNEL染色、SOD活力测定、MDA含量测定 以及Wenstem blot研究体内环境中Trx．1对缺血再灌注皮瓣的保护作用、分子机 制和预后意义，以及重组人Trx．1蛋白对皮瓣缺血再灌注损伤的治疗价值。 结果： 1、临床缺血再灌注皮瓣组织标本内细胞凋亡程度明显升高(p0．01)，同时Trx．1 表达量明显降低(p0．01)，并且二者呈现高度线性负相关(r2=0．89，P0．01)。 2、缺氧环境能够导致HaCAT细胞内Trx．1表达量明显降低(p0．01)，并上调 ASK-MAPK凋亡信号通路蛋白ASKl、P．p38以及凋亡标志蛋白c．PARP的表达 (p0．01)。 3、应用重组人Trx．1蛋白预防性孵育HaCAT细胞能够提高细胞内Trx．1表达水平 (p0．01)，并显著降低凋亡相关蛋白HIF·1a、p-p38和c-PARP的表达(p0．05)。 4、在没有药物干预的情况下，小鼠缺血再灌注皮瓣内细胞凋亡程度明显升高(p 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院博士学位论文O．01)，同时Trx．1表达量明显降低(p0．01)，并且二者呈现高度线性负相关(r2 中国医学科学院北京协和医学院博士学位论文 O．01)，同时Trx．1表达量明显降低(p0．01)，并且二者呈现高度线性负相关(r2 =0．93，P0．01)。 5、预防性全身应用重组人Trx．1蛋白能够减轻皮瓣缺血再灌注相关的病理损伤，显 著提高小鼠缺血再灌注皮瓣的存活率(pO．01)。 6、小鼠缺血再灌注皮瓣中SOD活力显著下降，而MDA含量显著升高，与假手术 组比较差异具有统计学意义(p0．01)；重组人Trx．1蛋白给药后，皮瓣内SOD 活力明显升高，MDA含量明显下降，与非给药组之间的差异具有统计学意义(p 0．05)。 7、小鼠缺血再灌注皮瓣组织内的Trx．1表达量显著下降(PO．01)，同时 ASK．MAPK凋亡信号通路蛋白ASKl、p-p38以及凋亡标志蛋白c1．caspase 3的 表达量显著升高(p0．01)；预防性全身应用重组人Trx．1蛋白能够提高皮瓣组 织内Trx．1的含量(pO．01)，并且下调ASK-MAPK细胞凋亡通路相关蛋白 ASKl、p38的磷酸化水平和凋亡关键酶cas