受质浓度影响酵素催化反应速率.PPT

範例 6-2 測定 [S] p.212 前穩態動力學可以提供特定反應步驟的證據 穩態動力學最主要的兩個實驗參數為 kcat與 kcat/Km。 這兩個參數會因為 pH 值及溫度的改變而改變，並可以從這些變化取得關於反應步驟的其他資訊。 對一個酵素催化反應的完整敘述，需要能直接測量反應中每個步驟的反應速率。 p.213 酵素受可逆及不可逆抑制作用 可逆的抑制 Reversible Inhibition 競爭性抑制劑（competitive inhibitor）與受質競爭酵素的活性部位。 當競爭性抑制劑存在時，Michaelis-Menten 方程式（6-9 式）會變成： 其中 p.213 p.214 BOX 6-2 以動力學測定抑制機制 p.215 圖6-15　三種可逆的抑制作用。(a) 競爭性抑制劑與酵素的活性部位結合；KI 為抑制劑與酵素 E 結合之平衡常數。 圖 6 – 15(a) p.215 圖6-15　三種可逆的抑制作用。(b)非競爭性抑制劑的結合位置不在活性部位，並且只與 ES 複合體結合。KI 是抑制劑與 E 結合的平衡常數；KI’是抑制劑與 ES 結合的平衡常數。 圖 6 – 15(b) p.215 圖6-15　三種可逆的抑制作用。(c) 混合性抑制劑的結合位置也不在 活性部位，但是可以與 E 或與 ES 結合。 圖 6 – 15(c) 不同於競爭性抑制劑，非競爭性抑制劑（uncompetitive inhibitor）的結合位置不在受質活性部位，而且只與 ES 複合體結合（與競爭性抑制劑不同）。在非競爭性抑制劑的存在下，Michaelis-Menten 方程式會變成： p.215 混合性抑制劑（mixed inhibitor）也是與酵素結合在受質活性部位以外的地方。不過它會與酵素或是酵素受質複合體兩者皆結合。速率方程式如下： 有一種實際實驗極少發生的特殊情況是當α＝α’ 時，傳統上稱為非競爭性抑制（noncompetitive inhibition） p.215 表觀 Km 就是等於 [S]，在此 [S] 濃度下，V0 為表觀 Vmax 的一半，或是 V0= Vmax/2α’（通式）。這種情況發生在當 [S] = αKm/α’時。因此，表觀 Km =αKm/α’而這個通式在 α 或 α’等於 1.0 的時候會變成更為簡化。 不可逆性抑制劑（irreversible inhibitors）會共價鍵結或破壞酵素上重要的酵素活性官能基，或與酵素形成一個特別穩定的非共價聯結。 p.216 p.216 圖6-16　不可逆的抑制。胰凝乳蛋白酶與 diisopropylfluorophosphate（ DIFP）反應，修飾了 Ser195 後，造成不可逆的方式抑制酵素活性。由這反應可以證明 Ser195 是胰凝乳蛋白酶活性部位中重要的絲胺酸。 圖 6 – 16 範例 6-3　抑制劑對Km的影響 p.216 一個特別種類的不可逆性抑制劑，稱為自殺性失活劑（suicide inactivators）。這些化合物在與特定酵素的活性部位結合之前，較不具反應性的。自殺性失活劑進行正常催化反應的前幾個化學步驟，但是接下來卻不形成正常的產物，反而轉變為一個非常活躍的化合物，並與酵素產生不可逆的結合。這些化合物也被稱為「以機制為基礎的失活劑（mechanism-based inactivators）」，因為它們藉用正常的催化反應，使酵素失去活性。 pH 值影響酵素的活性 酵素具有其最適 pH 值（或 pH 值範圍），當達到最佳的 pH 值時，酵素的活性達到最大 p.216 p.217 圖 6 – 17 p.204 圖6-17　pH 值對於兩個酵素活性影響的剖析圖。這些曲線是在不同 pH 值緩衝液中，測量反應進行的起始速度所繪製而成。因為 pH 值是對數單位，每刻度反映出氫離子濃度有10 倍的改變，因此 V0 的改變也以對數為單位繪製成圖。酵素活性的最佳 pH 值通常接近於該酵素存在生物體時之環境的 pH 值。胃蛋白酶是在胃進行消化作用時，作為水解一些蛋白質胜肽的酵素，其最佳的 pH 值大約在 1.6，而胃液的pH 值在 1 和 2 之間。肝細胞的葡萄糖-6-磷酸酶負責將醣類釋放至血液中，其最佳的 pH 值是 7.8 左右，而肝細胞的細胞質正常 pH 值大約是 7.2。 總結 6.3 大部分酵素通常都有一些共同的動力學特性。當受質加入酵素之後，反應會快速地達到穩態，此時 ES 複合體形成的速率與破壞的速率達到平衡。當受質的濃度增加時，在固定濃度的酵素之下形成穩態的反應速率增加，循著正雙曲線，達到其特有的反應最大速率Vmax，此時所有的酵素都與受質作用形成複合體。 當加入的受質濃度使初始反應