实验A偶氮胂Ⅲ色法测定血清总钙.docVIP

实验A 偶氮胂Ⅲ比色法测定血清总钙 一、实验原理 钙在体内有许多功能，它不仅作为骨和牙齿的结构材料成分，同时起着维持正常神经肌肉和血液凝固的功能。在血浆中，钙只要有二种存在形式：与白蛋白结合和离子化。结合钙没有生理活性，可能是作为钙的运输方式；离子钙具有重要的生理意义，它的异常变化会发生临床症状。钙水平增加常见于原发性甲状旁腺机能亢进、维生素D过多、恶性肿瘤等。钙浓度降低多见于甲状旁腺机能减退、假性甲状腺机能减退、维生素D缺乏、肾疾病、肾变性、脂肪痢等消化不良综合征。 在中等酸性条件下，血清钙与偶氮胂Ⅲ（Arsenazo Ⅲ）络合形成紫红色的偶氮胂Ⅲ-Ca2+复合物，最大吸收峰在660nm处。通过比较标本、标准和试剂反应后的吸光度A值，求得血清(浆)钙含量。 二、试剂与器材 1. 钙测定试剂：偶氮胂Ⅲ0.18mmol/L、磷酸盐缓冲液100mmol/L。 2. 钙标准液（校准品）：2.5mmol/L。 3. 紫外-可见分光光度计。 三、操作步骤 加入物 测定管 标准管 空白管 血 清（μl） 50 - - 标准液（μl） - 50 - 去离子水（μl） - - 50 显色剂（μl） 5000 5000 5000 充分混匀，放置室温3min（显色后，可稳定2小时），用空白管调零，在660nm波长处读取各管的吸光度值。试剂和样品用量可按比例改变。 四、结果计算 式中，C—血清中总钙含量，mmol/L； A—测定管吸光度； As—标准管吸光度； 2.5—钙标准液浓度（mmol/L）。 五、参考范围 血清钙：2.10～2.60mmol/L（8.4~10.4mg/dl）； 尿钙与饮食有关，一般参考值范围：2.5~7.5 mmol/24小时。 六、注意事项 1、引用的参考值范围代表本法的期望值，仅供参考。建议各实验室验证这一参考值范围或建立自己的参考值范围。 2、钙、镁等无机离子的测定受试管清洁度影响较大，因此必须保证试管清洁或使用一次性试管，严防外源性Ca2+的污染。 3、高脂血标本可产生正干扰，消除的办法是做标本空白管（50μl血清加5ml蒸馏水后于660nm得吸光度值，然后与被测定管吸光度值相减。 4、试剂中含有防腐剂叠氮钠，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。 实验B 磷钼酸盐法测定血清中的无机磷 一、实验原理 无机磷在体内多数以磷酸盐形式存在，主要为骨骼的无机成分，但是在细胞中也以磷脂和核酸形式存在，如腺苷三磷酸（ATP）还参与体内的能量转换。血浆中的无机磷呈磷酸钙的形式，因此血浆无机磷的水平与钙水平息息相关。血清或尿液中无机磷的检测主要用于肾功能失调，骨骼和甲状旁腺疾病等的诊断。在肾功能衰竭、甲状旁腺功能减退、假性甲状旁腺功能减退以及骨骼和细胞内磷酸钙流失时，无机磷浓度上升。因吸收不良、甲状腺功能亢进和维生素D缺乏时，无机磷浓度下降。同时进行钙监测可以获得更多的信息。 在酸性环境中，样品中的无机磷离子与钼酸反应生成磷钼酸复合物，用分光光度法在340nm测定。 二、试剂与器械 1、磷试剂（R）：硫酸360mmol/L、氯化钠154mmol/L、钼酸铵3.5 mmol/L。 2、磷标准品（无机磷）：1.62 mmol/L。 3、紫外-可见分光光度计。 三、操作步骤 加入物 测定管 标准管 空白管 血 清（μl） 50 - - 标准液（μl） - 50 - 去离子水（μl） - - 50 磷试剂（μl） 5000 5000 5000 混匀，室温下放置5分钟（显色后，可稳定1小时），340nm波长比色，以空白管调零，读取各管的吸光度值。 四、结果计算 式中，C—血清中无机磷含量，mmol/L； A—测定管吸光度； As—标准管吸光度； 1.62—无机磷标准应用液浓度（mmol/L）。 五、参考值 血清、血浆：0.87~1.45mmol/L（2.7~4.5mg/dl）； 尿液：9.65~32.3 mmol/24小时（0.3~1.0g/24小时） 六、注意事项 1、引用的参考值范围代表本法的期望值，仅供参考。建议各实验室验证这一参考值范围或建立自己的参考值范围。 2、当检验结果大于6.5mmol/L时，请用生理盐水稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 3、试剂中含有防腐剂和稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。 4、试剂和样品用量可按比例改变。 5、胆红素≤220μmol/L，维生素C≤0.4g/L，甘油三酯≤5.0mmol/L，对结果基本不影响。 七、思考题 血钙与血磷的乘积在医学上有何意义？