JAP-027 哒草特检测方法.pdf

哒草特检测方法 1．分析目标化合物 哒草特、哒草特羟基物、哒草特羟基物结合物 2、仪器设备 带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪。 3、试剂 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。 0.2 mol／L乙酸铵缓冲液：将15.4g乙酸铵溶解在水中至1000mL，加氨水调节pH9。 4．标准品 哒草特：含哒草特99％以上，熔点为27℃。 哒草特羟基物：含哒草特羟基物99％以上，熔点为216℃~218℃。 5．试验溶液的制备 a 提取方法 谷类、豆类和种子类：将样品粉碎，通过420μm的标准网筛后，称取其10.0g， 加入20mL水，放置2小时。 蔬菜：准确称取约1kg样品，必要时定量加入适量水，搅碎混合均匀后，称 取相当于20.0g样品的量。 加入120mL丙酮：0.2 mol／L乙酸铵缓冲液： 吗啉（100：20：0.5）混合溶 液，搅拌3分钟后，用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中。取出滤 纸上的残留物，加入50mL上述混合溶液，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩 器中，40℃以下浓缩至约70mL。 将其移入预先注入50mL乙酸乙酯的200mL分液漏斗（Ⅰ）中，用15mL0.2 mol ／L乙酸铵缓冲液洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并滤液于上述分液漏斗中， 用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，水层移入200mL分液漏斗（Ⅱ）中。加入50mL 乙酸乙酯，按上述同样操作，水层移入200mL三角瓶中。 b、水解 加入1mol／L硫酸调节pH4，装上空气冷凝管在60℃加热40分钟。冷却后，移 入200mL分液漏斗中，用15mL蒸馏水洗涤三角瓶，合并洗液于分液漏斗中。加入 50mL乙酸乙酯，用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙酸乙酯层移入200mL三角瓶 中，水层中加入50mL乙酸乙酯，按上述同样操作，合并乙酸乙酯层于上述三角瓶 中。加入适量的无水硫酸钠，不时摇荡、混合，放置15分钟后，滤入磨口减压浓 缩器中。再用20mL乙酸乙酯洗涤三角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，重复操 作两次。合并两洗液于减压浓缩器中，40℃以下除去乙酸乙酯。残留物中加入1 滴乙酸，用20mL丙酮：正己烷（1：9）混合溶液溶解。 c、净化 ① 合成硅酸镁柱色谱法 在内径15mm、长300mm色谱柱中注入5g悬浮在正已烷中的柱色谱用合成硅酸 镁，其上面再装入约5g无水硫酸钠，放出正已烷至柱上端留有少量正已烷。柱中 注入a 提取方法所得的溶液后，注入80mL丙酮：正己烷（1：9）混合溶液，弃去 流出液，再注入60mL丙酮：正己烷（2：8）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓 缩器中，40℃以下除去丙酮和正己烷。残留物中加入1滴乙酸，用10mL丙酮：正 己烷（2：8）混合溶液溶解。 ②硅胶柱色谱法 在内径15mm、长300mm色谱柱中注入5g悬浮在正已烷中的柱色谱用硅胶（粒 径630～200μm），其上面再装入约5g无水硫酸钠，放出正已烷至柱上端留有少 量正已烷。柱中注入①合成硅酸镁柱色谱法所得的溶液后，注入10mL丙酮：正己 烷（2：8）混合溶液，弃去流出液。再注入100mL丙酮：正己烷（2：8）混合溶 液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去丙酮和正己烷。残留物中加 入甲醇溶解，准确至1mL，此为试验溶液。 6、操作方法。 a 定性试验 按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。 操作条件 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。 柱：内径4～6mm、长150～250mm不锈钢管。 柱温：40℃ 检测器：波长280nm。 流动相：甲醇：水：乙酸（4：6：0.05）混合溶液。调整流速使在13～14 分钟流出。 b 定量试验 根据与a 定性试验相同试验条件所得的试验结果，用峰高法或峰面积 法对哒草特羟基物进行定量，其乘以系数1.83求得哒草特的含量。 7．定量限 0.01 mg/kg （油菜籽：0.05 mg/kg）。 8．注意事项 将哒草特和哒草特羟基物结合物转变成哒草特羟基物之后，对哒草特羟基物 进行定量，其含量乘系数换算成哒草特的含量，此为哒草特的分析值。 9．参考文献 无 10.类型 A