商品蛋鸡源J亚群禽白血病病毒分离株生物学特性研究-预防兽医学专业毕业论文.docxVIP

吴晓平：商品蛋鸡源J亚群禽门血病病毒分离株牛物学特性研究商品蛋鸡源J亚群禽白血病病毒分离株生物学特性研究 吴晓平：商品蛋鸡源J亚群禽门血病病毒分离株牛物学特性研究 商品蛋鸡源J亚群禽白血病病毒分离株生物学特性研究 研究生： 吴晓平 导 师： 秦爱建教授 摘要 J亚群禽自血病病毒(avian leukosis virus subgroup J，ALV．J)首次分离于上个 世纪80年代，系外源性ALV与宿主内源性序列EAV-HP的重组体。近年来，该 病在我国养鸡业中呈流行趋势。由于诱发肿瘤、患鸡胴体废弃和引起免疫抑制， ALV-J给养禽业带来巨大经济损失和严重威胁。ALV-J在中国的一个重要的发病 特点是致瘤宿主谱系的扩展，以往研究证实不易发生肿瘤的商品蛋鸡受到ALV-J 感染后也能诱导较高的肿瘤发生率，同时研究证实中国的地方鸡种也可感染致 瘤，表现出不同于国际上ALV．J感染的特殊性和复杂性。研究ALV．J的生物学 特性及致瘤宿主谱扩展的机理有助于该病的控制与根除。本研究对ALv-J引起的 商品蛋鸡血管瘤、髓细胞瘤的组织病理学变化进行了观察，对表现血管瘤、髓细 胞瘤病的商品蛋鸡分离的ALV-J毒株进行了分离和鉴定，对不同鸡群的ALV．J 前病毒基因组序列的变异规律进行了分析，对商品蛋鸡ALV-J受体进行了分离鉴 定，为探索ALv-J致病机理提供了新材料。 1．商品蛋鸡血管瘤型J亚群禽白血病的病理学检测及分子诊断 为弄清商品蛋鸡群中血管瘤的病毒感染和致瘤原因，本研究对送检的ALV．J 疑似病例进行了剖检、病理学观察、免疫组化检测及ALV．J特异性RT．PCR检 测，发现商品蛋鸡血管瘤型ALV．J病例在海兰褐送检样品中的比率为54．5％ (6／1 1)，在罗曼蛋鸡送检样品中比率为100％(2／2)，白羽蛋鸡群中未发现感 染病例。而感染的商品蛋鸡所表现出的主要肿瘤类型是单纯血管瘤以及血管瘤与 髓样细胞瘤(ML)并存，各占44．4％(4／9)。 大体病变：体表及肝脏、脾脏、肾脏、肌胃等器官表面及切面可见大小不等 的血管瘤，内含血液，部分病例内脏可见黄白色结节；组织学病变：脾脏、肝脏 等器官可见典型的海绵状血管瘤，有或无清晰壁层，处于不同的发育阶段，部分 病例的体表血管瘤壁层可见髓细胞浸润，部分病例在心脏、肝脏、脾脏或肾脏内 出现数量不等的髓样细胞增生，表现为实体瘤或髓样细胞浸润。1个病例的肾脏 中存在胞浆中含有嗜碱性颗粒的成髓细胞瘤。在血管瘤与ML并存的病例中，两 扬州大学博士学位论文种肿瘤的发育阶段存在差异，可能是相继发生。免疫组织化学检测发现：在肝脏、 扬州大学博士学位论文 种肿瘤的发育阶段存在差异，可能是相继发生。免疫组织化学检测发现：在肝脏、 脾脏及其它组织内的髓细胞内、肝脏实质细胞、血管瘤壁层一1-_皮细胞、脾脏网状 细胞内可见阳性信号。因此，在褐色商品蛋鸡中发现血管瘤、髓细胞瘤型伴发多 种肿瘤表型的J亚群禽白血病，在国内外尚属首次报道，显示出ALV．J在我国 商品蛋鸡群中感染状况的特殊性和严重性。 2．致商品蛋鸡血管瘤型ALV-J分离鉴定 将病理学检测及ALV—J特异性RT．PCR初步诊断为商品蛋鸡血管瘤、髓细胞 瘤型ALV．J感染的脾脏样品悬液分别接种单层DFl细胞以分离病毒，并以ALV．J 特异性单抗JE9进行问接免疫荧光检测(IFA)对分离毒进行鉴定，结果证实从 商品蛋鸡血管瘤、髓细胞瘤型J亚群禽白血病病例中分离到7株ALV_J，在初诊 为ALV．J感染的病例中分离率为77．8％(7／9)。 为追溯病毒来源，对于所检测的6个血管瘤发病鸡场的共同父母代蛋鸡场进 行ALV—J的ELISA检测，结果发现在此父母代蛋鸡场高日龄的鸡群中存在14％ (36周龄)和3 1％(60周龄)ALV．J特异性抗体，证实在此临床表现正常的父 母代蛋鸡场中存在ALV．J感染。父母代蛋鸡及商品蛋鸡感染ALV—J的临床表现 不同，可能是由于遗传背景对于ALV—J感染应答的影响或者是垂直传播及水平 传播的共同作用在蛋鸡繁殖育雏过程中放大了ALV．J的感染。 3．J亚群禽白血病病毒cDNA序列分析比较 本研究设计3对ALV-J特异性引物，以分离株感染的DFl细胞基因组作为 模板，进行ALv-J前病毒DNA全基凶序列进行分段PCR扩增，分析比较了 2007．2009年的商品蛋鸡分离株NHH、JS09GY3、JS09GY6的全序列，JS09GY2、 JS09GY5、HA08和HN的致瘤关键性序列，同时也对白羽肉鸡分离株SD9901、 YZ9901、YZ9902、NM2002．1和JS．nt的全序列进行比较和遗传分析。 结果表明：商品蛋鸡群分离毒株与肉鸡群分离毒株的全序列差异明显，在遗 传进化树上分属两个大的分支；对LTR的分析可见，R区最保守，U3区最易变