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组织工程骨血管化的研究进展 作者：何清义　李强　温立升　许建中  【关键词】 骨髓基质干细胞  组织工程骨具有巨大的临床需要及 应用 前景，用组织工程骨(tissue engineering bone，TEB）修复骨缺损的 研究 方兴未艾。 目前 大部分的研究都停留在小动物(如鼠、兔)体内原位或异位成骨，修复部位大都为非负重骨缺损，新生的骨组织还不能满足临床应用的需要。目前应用大块TEB修复大段骨缺损时，其核心部位往往发生缺血坏死，使修复归于失败，其主要原因在于未能很好解决TEB的血管化 问题 〔1〕。因为小块组织工程骨植入体内后，早期依靠组织液的渗透可获得营养，而大块组织工程骨仅靠组织液的渗透是远远不够的。目前国内外关于血管重建(包括毛细血管)研究尚处于起步阶段，主要 方法 有：(1)血管内皮细胞或血管平滑肌细胞+生物材料〔2、3〕；(2)生物材料+预制血管蒂或筋膜包裹；(3)生物材料+促血管生长因子〔4〕。第1种方法需要大量培养、扩增血管内皮细胞，周期长，而且需要从自体切取血管用于血管内皮细胞的分离、培养；第2种方法能够得到血管化的TEB，但必须将TEB异位植入，待血管束长入后再断蒂用于移植，不但有异位创伤的问题而且等待的时间也较长。直接应用促血管生长因子在体内迅速降解为无活性的片段，并且其在体内的半衰期较短，会很快流失在周围组织中，达不到理想的效应浓度；如果采用首次大剂量给药，易导致局部血管瘤〔5〕。现常用的缓释技术如材料表面化学结合、高分子材料微囊包裹技术等，不仅损害其生物活性，其缓控释作用也存在多方面不足。  有学者通过尽量模拟体内血管发生与生成的生理过程，构建组织工程血管来解决此问题。血管的形成分为血管发生(vasculogenesis)和血管生成(angiogenesis)。血管发生主要发生于胚胎期，通过内皮前体细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)分化成内皮细胞，在中胚层内形成血管丛，此过程受VEGF控制；血管丛的塑型、扩张属于血管生成过程，主要由血管生成素1(angiopoietin1,Ang1)调控〔6〕。血管分子生物学已破译了许多复杂的血管形成级联反应，包括：(1)启动：缺氧环境刺激VEGF分泌并结合VEGF受体(VEGFR)，刺激内皮细胞增殖、迁移进入微血管间隙；(2)增生：活化的内皮细胞形成纤维条索状突起结构；(3)塑型：Ang1与内皮细胞受体Tie2结合〔7〕，吸引周细胞、平滑肌细胞包绕幼稚血管。旧的围绕基质消化，并形成新的基质沉积。中空结构形成，周细胞环绕内皮，形成围绕血管的连续基膜。(4)血管成熟：在体内，通过灌注率和剪切力、低氧、其他生长因子等代谢因素作用于内皮，使多余细胞进入血循环、去分化、凋亡而成熟。因此，血管形成是一个有多种内分泌、旁分泌因子相互作用的多步连续反应，是一个生理需要与病理修复持续的动态过程，它涉及到细胞(EPCs、内皮细胞)，细胞因子(VEGF、Ang1)以及生物应力等。内皮细胞是血管生成过程中的最重要的调节细胞，所有的成血管因素皆围绕它发挥作用。但内皮细胞培养耗时费力，其规模扩增相当困难，并且内皮细胞的获取创伤较大，来源(静脉或动脉血管)极其有限，因而远远不能满足临床需要。内皮前体细胞(EPCs)存在于骨髓、脐带血与外周血中，前二者含量较丰富，后者含量较少(EPCs仅及前二者的十分之一)，EPCs被称为睡眠中的成体干细胞(sleeping adult stem cells)，它不仅可以分化为内皮细胞，还可分化为心肌细胞、平滑肌细胞等，其特征性的表型为表达三种细胞标记(CD133，CD34，VEGFR2）〔8、9〕。最新的研究表明EPCs在成体血管形成中起着重要作用，在缺血后肢、缺血心肌、损伤角膜、损伤皮肤以及肿瘤增生的血管形成中维持血管形成，替代脱落的内皮细胞并最终完成内皮化〔10~12〕。Yuyama等〔13〕的临床研究发现，CD34阳性的EPCs能够从骨髓中迁移出来参与新生血管的发生(neovascularisation)，运用含有EPCs的骨髓单核细胞(27×10～07×10 ells／人)注入缺血肢体的腓肠肌(试验组),与注射生理盐水的对照组比较，4周后其腋踝指数、透皮氧分压、静止疼痛和无痛行走等指标都有显著提高，这种改善和提高一直持续到24周，作者认为EPCs注射是一种安全、有效的 治疗 性血管手段。从狗的外周血中获取EPCs，经扩增后预植入Ⅰ型胶原网中，聚亚胺酯(polyurethane)包裹其作为内衬面并形成管腔，构成组织工程血管并移植入狗的两侧颈动脉，3个月后形成内衬为乳白色的血管，腔内覆盖连续平整的内皮细胞，Ⅷ因子染色阳性，并且该动脉腔内无血栓形成。因此，