冷鲜鸡全产业链弯曲菌生态分布特征及其冷藏条件下失活模型的建立-兽医学专业毕业论文.docxVIP

⑧论文作者签名．_一．型．至 ⑧ 论文作者签名．_一．型．至 指导教师签名．墨丝 论文评阅人1： 隍名．． 评阅人2： 左维逸 评阅人3： 韭晓蝰 答辩委员会主席： 挂垂羞 委员1： 胡松垡 委员2： 郑肖娟 委员3： 韭在 委员4： 奎肖粱 万方数据 兰世 兰世型鼍盖燃 笋一 尝慧一篙一警一 A Dissertation for Master’S Degree Submitted to The Graduate School，Zhejiang University Hangzhou，Zhej iang，CHINA Major Veterinary Medicine Presented by Liu Xi Supervised by Professor Li Xiaoliang June 2016 万方数据 浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特另tlDnn_．,t标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝’江盘堂或其他教育机构的学位或 证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文 中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：到丢 签字日期：≯膨年∥月刁日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝望太堂 有权保留并向国家有关部门或机 构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权澎鎏盘堂 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：判鼍 导师签名： 签字目期：沙以年彳月幻日 签字日期：≥驴，多年 锻叩 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 目 录 目录 摘要 l Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．，．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3 第一部分文献综述 6 第一章空质弯曲菌研究进展 ．7 1前言 7 2空肠弯曲首生物学特性 7 2．1形态特征 ．7 2．2培养特性． ． 7 3空肠弯曲酋分型方法 8 3．1血清分型 ．8 3．2基因分型 一9 4空肠弯曲首的分离鉴定 9 4．1样品采集与前处理 ．9 4．2预增菌与增茵 ．9 4．3分离培养 ．9 4．4鉴定 lO 5空肠弯曲首流行病学特征 ．．1 1 6防治措施 ．12 6．1国内防治措施 12 6．2国外防控进展 14 第二部分试验部分 ．15 第二章冷锌璃全产业链弯曲曹生态分布特征 15 1制『料． ．．16 1．1菌株 ． 16 1．2样品来源 16 1．3抗生素 ．17 1．4主要试剂及配制 17 1．5主要仪器 19 2方法 20 2．1基因组DNA提取 20 2．2弯曲菌多种PCR检测体系 ．20 2．3空肠弯凸菌生长曲线绘制 21 2．4弯曲菌增菌时间优化 22 2．5临床样品采集及处理 23 2．6弯曲菌的分离纯化 23 3结果 ． ． ．24 3．1弯曲菌菌落形态 24 3．2弯曲菌PCR鉴定 ．24 3．3弯曲菌多重PCR检测敏感性分析 ．．24 3．4生长曲线的测定 25 3．5人工模拟污染冷鲜鸡肉增菌条件 26 3．6临床样品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌总体检出率 26 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 目 录 3．7屠宰链各环节样品检测 27 3．8杭州市场上样品检测 28 4讨论 28 第三章空肠弯曲曹分离株的多位点序列分型 3l 1材料 32 1．1菌株 32 1．2主要试剂及配制 32 1．3主要仪器 ．．33 2方法 33 2．1分离株复苏 33 2．2基因组DNA提取 33 2．3鉴定 33 2．4 MLST分析 ． ．33 3结果 35 3．1管家基因扩增 35 3．2 PubMLST网站分析 ．35 3．3空肠弯曲菌分离株基因序列型的多样性 36 3．4空肠弯曲茵分离株序列型之间的关系 40 4讨论 45 第四章空肠弯曲曹荧光定量PCR检测方法的建立及应用 48 1材料 49 1．1菌株 49 1．2主要试剂及配制 49 1．3主要仪器 49 2方法 50 2．1引物和探针设计 50 2．2提取基因组DNA ．50 2．3荧光定量PCR扩增体系 ．50 2．4荧光定量PCR方