三种海水鱼类胚胎玻璃化冷冻保存研究-水产养殖专业论文.docx

华中农业大学博士论文三种海水鱼类胚胎玻璃化冷冻保存研究 华中农业大学博士论文 三种海水鱼类胚胎玻璃化冷冻保存研究 摘要 由于自然环境演变和人类生产活动的影响，自然水体中的鱼类有相当一部分已 经濒临灭绝，保护环境，保护物种已是人类面临的一大课题。鱼类配子和胚胎超低 温冷冻保存做为种质资源长期保存的技术途径之一，具有广阔的应用前景。 本课题首次将玻璃化冷冻思想引入海水鱼类胚胎冷冻保存研究，首次利用珍贵 海水养殖鱼类花鲈(Lateolabrax japonicus)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)和大菱 鲆(Scophthalmus maximus)不同发育阶段的胚胎做为实验材料，对海水鱼类胚胎玻 璃化冷冻保存技术进行了较系统的研究。 本文首先对1，2一丙二醇、甲醇、二甲亚砜、甘油、二甲基甲酰胺、乙二醇、 聚乙烯毗咯酮、聚蔗糖、葡聚糖、聚乙二醇等渗透性抗剂和非渗透性抗冻剂毒性进 行了研究，认为1，2一丙二醇和甲醇对鱼类胚胎的毒性较低，在玻璃化液中加入聚乙 烯吡咯酮有利用于玻璃化形成和防止反玻璃化现象发生。 通过对基础液盐成分的筛选和调节，溶液渗透压和pH值的测定，胚胎在基础 液中培养研究，筛选出了适合于胚胎玻璃化冷冻保存的基础液BS2。 在抗冻剂毒性分析的基础上，配制了80种不同成分和浓度的抗冻剂，通过冷 冻和解冻时玻璃化形成能力，选择出了适合于花鲈胚胎冷冻保存的玻