溃疡病与烂皮病胁迫下北京杨水分生理变化及miRNA的差异表达-林木遗传育种专业毕业论文.docxVIP

溃疡病与烂皮病胁迫下北京杨水分生理变化及miRNA的差异表达-林木遗传育种专业毕业论文.docx

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目 目 录 目 录 摘要 . . ..I Abstract ..III 第一章绪论 1 1研究背景 ... ... 。1 2杨树溃疡病的研究进展 l 2.1杨树溃疡病的症状 一1 2.2杨树溃疡病的病原菌 一2 2.3杨树溃疡病的发生 ..2 2.4杨树溃疡病的致病机理 一2 2.5杨树对溃疡病的抗病机制 一3 3杨树烂皮病的研究进展 .....3 3.1杨树烂皮病的症状 一3 3.2杨树烂皮病的病原菌 一4 3.3杨树烂皮病的发生 ..4 4 miRNA的研究进展 ... 。4 4.1miRNA的特点 .4 4.2miRMA的合成 5 4.3mi RNA的作用机制 5 4.4miRNA的研究方法 .5 4.5miRNA的起源与进化 .5 4.6rniRNA在植物的作用 .6 5本研究的构想及出发点 6 6拟采用的技术路线 7 第二章溃疡病与烂皮病胁迫下北京杨的水分生理变化 8 1材料与方法 8 1.1病原菌来源 ..8 1.2菌株的活化与培养 ..8 1.3植物材料及培养 ..8 万方数据 目 目 录 1.4试验的分组与接种 .8 1.5溃疡病菌、烂皮病菌侵染的北京杨枝干水力学特征实验的取样方法 .9 1.6溃疡病菌、烂皮病菌侵染过程中北京杨枝条顶端水势的测定 10 1.7溃疡病菌、烂皮病菌侵染过程中北京杨枝干水导损失率的测定 10 1.8溃疡病菌、烂皮病菌侵染过程巾北京杨枝干可溶性糖含量和淀粉含量的测定10 1.8.1材料处理 .10 1.8.2可溶性糖和淀粉含量的测定 .10 2结果与分析 。12 2.1北京杨在溃疡病与烂皮病菌胁迫下植株地上部分的水力学特征变化 12 2.1.1植株顶端水势 .12 2.1.2枝条水导损失率 .13 2.2溃疡病菌和烂皮病菌侵染对北京杨枝干可溶性糖和淀粉含量的影响 14 2.2.1可溶性糖含量变化 .14 2.2.2淀粉含量变化 .17 3讨论 .19 3.1植株水势的变化 19 3.2栓塞 .19 第三章溃疡病菌与烂皮病菌胁迫下miRNA高通量测序分析 .21 1材料与方法 。2l 1.1取样 21 1.2总RNA的提取 .2 1 1.3 miRNA测序 2l 1.4 miRNA测序数据分析流程 ~21 1.5 qRT-PCR验证miRNA的差异表达 22 2结果与分析 23 2.1总RNA质量检测 .23 2.2原始数据质量信息统计 24 2.3测序数据过滤 26 2.4小RNA序列的长度分布分析 .27 2.5Clean ReadS与参考序列比对分析 28 2.6已知miRNA分耖i ..28 万方数据 目 目 录 2.7新miRNA预测 .29 2.8miRNA差异表达分析 30 2.8.1已知miRNA差异表达分析 ..30 2.8.2新的miRNA差异表达分析 ..32 2.9miRNA聚类分析 33 2.10miRNA靶基因预测 ,34 2.1 1靶基因GO功能注释 ..34 2.12靶基因KEGG功能注释 .35 2.13qRT PCR对差异表达miRNA的验证 36 3{寸论 .37 3.1miRNAl65和miRNAl66的潜在作用 37 3.2miRNAI 69的潜在作用 .38 3.3miRNAl 72潜在作用 .38 第四章结论 . 参考文献 4l 致谢 .47 附录1 . . ..48 附录2 . 00 5f|录3 .65 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 溃疡病和烂皮病是对杨树危害最为严重的病害,与杨树的水分生理状况紧密相 关。虽然利用药剂和生物防治方法已取得了很大成效,但从另外的角度讲,培育抗病 品种才是最为有效的手段。鉴于常规育种定向培育抗病林木品种的困难,如果弄清溃 疡病和烂皮病侵入杨树的分子机理,则可用分子生物学和基因工程手段定向培育抗病 品种。MicroRNA是动植物体内广泛存在的一类非编码RNA,广泛参与生命的各个 进程。从miRNA差异表达调控角度出发,对杨树溃疡病和烂皮病发生抗病防御机制 进行分析,可为杨树抗病育种提供理论依据,并为其他相关植物病害的病理机制研究 提供全新的视角,因此具有重要的理论和借鉴意义。 本研究以最易染病的北京杨为试验材料,通过高通量测序,对溃疡病和烂皮病胁 迫下北京杨miRNA的差异表达状况结合杨树分别感染两种病后的水分生理变化进行 研究,以期为抗病育种提供更多参考。取得的结果如下: 1在试验处理后的第4天溃疡病处理组、烂皮病处理组与对照组比较,水导损失率 都显著高于对照组,第6、8天的两组与对照组问的水导损失率差异并不显著。两种 病菌处理下的植株的水导损失率的变化规律一致。因此,两种病菌处理的试验结果表 明,两种病菌接种初期显著降低了杨树的水分疏导能力,而随着试验处理时间的延长, 北京杨水分运输能力

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