三种样品保存液对禽流感病毒检出率的影响研究-兽医学;临床兽医学专业毕业论文.docxVIP

Classified Classified Index： Code：10224 Confidential(yes／no)：nO NO．：120610458 Dissertation for the Master Degree Effect of Three Media on Detection Rates of Avian Influenza Virus Candidate：Zhang Xiaochun ‘1’、searcher HuangHuang 15aoxu Degree Category：Master ofAgriculture College：Col lege of Veterinary Medicine First level discipline：Veterinary Medicine Second level discipline：Clinical Veterinary medicine Harbin China June 2015 万方数据 ||IIII ||IIII I I II III II II III 111 日录 Y2771 883 曼曼曼笪曼曼曼曼皇璺曼舅曼曼曼曼皇曼曼曼曼曼!!曼曼!曼!!曼!!!!!曼曼曼!!!!!曼!!!!!!!!S————————一 j 目 录 摘要 ．．I 英文摘要 lII 1前言 l 1．1禽流感的概述 1 11．1禽流感病毒的出现及发展 ．．1 1．1．2禽流感病毒的分类和命名 ．．1 1．1．3禽流感病毒的形态结构特点及理化特性 2 1．1．4禽流感病毒的感染复制机制及遗传变异特点 4 1．1．5禽流感的流行病学 ．5 1．2禽流感拭子样品的采集、运输和保存 ．．6 1．2．1拭子类型 ．．6 1．2．2拭子样品采集方法 ．7 1．2．3样品保存液 ．．8 1．2．4运输方式 ．．9 1．2．5温度 1 0 1．3本课题研究的意义 ．．1 0 2材料与方法 ．11 2．1实验材料 ．．11 2．1．1禽流感病毒株 ．11 2．1．2鸡胚 ．11 2．1．3主要试剂 11 2．1．4主要仪器和设备 ．1 1 2．1．5其他材料 11 2．1．6引物设计 ．11 2．1．7主要溶液和培养基的配制 ．12 2．1．8 DH5u感受态细胞的制备 ．．12 2．2实验方法 ．13 2．2．1实验设计 13 2．2．2 SPF鸡粪的检测 14 2．2．3种毒的收集与检测 17 2．2．4种毒EID50测定 ．19 2．2．5三种样品保存液对模拟样品的影响 一20 2．2．6样品采集 20 2．2．7样品的处理和保存 21 2．2．8样品的检测 2l 3结果 ．24 3．1 SPF鸡粪的检测结果 24 万方数据 东北农业大学农学硕士学位论文3．2种毒的检测结果 东北农业大学农学硕士学位论文 3．2种毒的检测结果 24 3．3序列测定结果 一24 3．4种毒AIv-l的EID50测定结果 25 3．5三种样品保存液对模拟样品的影响 25 3．5．1模拟样品在4C保存7 d测定结果 25 3．5．2模拟样品一20C保存7 d(经两次冻融)测定结果 26 3．6实际样品检测结果 一26 3．6．1拭子样品 26 3．6．2粪便样品 27 3．6．3 HA和NA基因RT-PCR扩增结果 28 3．6．4测序结果 29 3．6．5检测出的2株H7N9禽流感病毒HA和NA基因的遗传特性 ．29 3．6．6检测出的31株H9N2禽流感病毒HA基因的遗传特性 ．．32 4讨{仑 ．．34 4．1 SPF鸡粪的作用 34 4．2种毒AIV_1检测的目的 一34 4．3禽流感病毒的病原学检测 34 4．4检测结果的不一致性 一35 4．5实际样品检测的特异性和灵敏度 35 4。6样品保存对AIV的影响 一35 4．7三种样品保存液对AIV的影响 35 5结论 ．．37 致 谢 ．38 参考文献 ．39 附录 43 攻读硕士学位期间发表的学术论文 一44 II 万方数据 CONTENTSCoNTENTS CONTENTS CoNTENTS Abstract ．．．． ．．． ． ． ．． ．．． ．．．． ．． ． ． ． ．．I Abstract in English．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．- · ．．．．． ·········-·----······-··· 1 Introductio