质谱的蛋白质组绝对定量新方法和新技术-生物分子高效分离与表征.DOCVIP

国家重大科学研究计划 课题任务书 项目名称：蛋白质定量新方法及相关技术研究 课题编号：2012CB910603 课题名称：基于色谱-质谱的蛋白质组绝对定量新方法和新技术 中华人民共和国科学技术部制 二○一一年九月  一、研究内容 针对绝对定量蛋白质组学中存在的规模化内标肽制备困难、标记反应效率低、规模化多反应监测难以实现和非标记方法重复性和准确度差等科学问题，本课题为了提高绝对定量方法的准确度、通量和精确度，拟开展以下三个方面的研究，其中前两年侧重于标准内标肽段的制备、表征和发展固定化酶18O酶促的蛋白质组标记以及色谱保留时间依赖的多反应监测质谱分析方法，并将其用于对蛋白质组进行绝对定量的方法，实现目标蛋白质组和关键蛋白质的动态监测和绝对定量分析，并使绝对定量方法的误差小于10%；后三年重点研究生物双重标记方法、元素标记方法以及非标记规模化定量方法，旨在发展高通量、实用性强和能高覆盖蛋白质组的绝对定量方法。 1. 内标肽的设计、合成和表征 标准内标肽段的制备、表征和储存是蛋白质绝对定量的前提和基础，也是规模化蛋白质绝对定量的主要瓶颈。为此，本研究将首先建立两种标准内标肽段制备和表征的技术路线：包括化学合成和生物合成标准肽段方法、色谱纯化和纯度表征方法以及基于标准氨基酸、稳定同位素标记的氨基酸同位素稀释法结合选择性反应检测质谱的含量测定方法，同时建立标准肽段储存方法，为目标蛋白质组绝对定量提供参考物质。 2. 蛋白质组绝对定量标记新方法 基于内标物质结合质谱绝对定量方法仍是复杂生物样品中蛋白质绝对定量的首选方法，其核心是内标物质的标记。为此，将发展三种标记方法，从不同角度探索高效、稳定的标记并结合质谱用于蛋白质规模化绝对定量新方法， 3. 非标记规模化蛋白质组绝对定量新方法 发展非标记规模化蛋白质组绝对定量与多反应监测质谱校正相结合的定量方法，建立高准确度的非标记规模化蛋白质组绝对定量新方法。  二、预期目标 总体目标： 发展内标肽的设计、合成和表征方法、蛋白质/肽新型标记方法结合质谱绝对定量方法以及非标记规模化蛋白质组绝对定量新方法，并使标记结合质谱绝对定量方法的误差小于10%；经质谱鉴定的目标蛋白质的非标记规模化绝对定量覆盖率达到80%以上，为蛋白质功能研究、疾病标志物的发现和验证提供重要技术支撑。 五年目标： 1) 通过建立内标肽的设计、合成和表征方法，为目标蛋白质组的准确绝对定量提供必须的参考物质； 2） 通过建立蛋白质组标记新方法以及色谱保留时间与多反应监测质谱结合的蛋白质组绝对定量方法，实现蛋白质组的动态监测和绝对定量分析； 3） 通过建立非标记规模化蛋白质组绝对定量新方法，同时发展绝对定量数据提取和处理方法，提高复杂生物样本中蛋白质组绝对定量的准确度； 4） 发表SCI论文19篇以上，其中IF8文章2篇，IF5文章8篇；申请发明专利5 项； 博士7人，博士后1人；形成一支优秀的定量蛋白质组新方法和相关技术的人才队伍。