磷酸化介导的UGT1A3代谢活性差异的初步研究-药物分析学专业论文.docxVIP

浙 浙 江 人 学 硕 _卜学 位 论 文 文 摘 液 再 次 感 染 细胞 以获 得 U G T IA 3 重组 酶 。 采 用 w estern 一b lot 检 测 蛋 白质 水 平 上 u G T IA 3 的表 达 。 以栅 皮 素 为 底 物 ，H P L c 方 法 检 测 重 组 酶 的 活 性 ，并 进 行 方 法 学 考 察 ; 同 时测定 了 u G T IA 3 对 棚 皮 素 的代 谢 动 力 学参 数 。 由于 构 建 时在 蛋 白 的 3 ’ 端 加 入 了 6 只HI S 的组 氨 酸 标 签 ，因此运 用 镍 柱 亲 和 色 谱 方 法 对 细 胞 中 u G TI A 3 重 组 酶 进 行 亲 和 纯 化 。 结果 得 到 的 高 滴度 病 毒 液 ( 34 .4 仁g m L 一‘) 感 染 5 . 细 胞 ，利 用 w estem b lot 检 测 到 60 kD 左 右 有 清 晰 条 带 出现 ，与 u G T IA 3 预 期 大 小 相 符 ，表 明 目 的蛋 白在 细 胞 中得 到 良好 表 达 。 以棚 皮 素 为 底 物 ，对 重 组 酶 的代 谢 活性 进 行 分 析 ，H P L c 检 测 到 4 个 新 色 谱 峰 ，经 p一葡 萄 糖 醛 酸水 解 酶作 用 后 4 个 峰 消 失 ，确