两亲性短肽与磷脂膜的作用机理研究-化学工程与技术专业论文.docxVIP

摘 摘 要 细菌多抗药性的产生与蔓延，使得传统抗生素类药物的应用受到了限制。20世纪 70年代人类发现了抗菌肽，经过多年的研究积累，抗茵肽由于其分子量小、抗菌广谱性、 抗菌机理有别于传统抗生素等特点，成为了人类研发新型抗生素类药物的热门。研究表 明抗菌肽是通过破坏细胞质膜来达到杀菌效果的，已经提出了其与细胞质膜作用的“桶 板”、“螺线管”和“地毯式”等模式，但却没有一种普遍适用的机理能够解释抗菌肽 的作用方式。同时，由于天然抗菌肽提取纯化成本高和应用生物工程法生产存在技术难 关的原因，人们在研究抗菌肽与磷脂膜的作用模式时经常应用人工合成抗菌肽。本实验 室根据天然肽的结构特点，依据螺旋轮法则设计并应用固相法合成了两亲性短肽 G(IIKK)。I．NH2(x=l，2，3，4)和GKI(KKII)2KII-NH2，通过比浊法实验测定了它们对Bacillus subtilis 168、Escherichia coli 5a的最低抑菌浓度，发现随着螺旋数目的增加这些肽的抗 茵活性逐渐加强；通过扫描电子显微镜观察发现这些肽对细菌细胞膜有明显的破坏作 用；在此基础上，借助LB单层膜技术研究了这些肽的界面活性、与二棕榈酰磷脂酰胆 碱(DPPC)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、棕榈酰油基磷脂酰胆碱(POPC)等磷脂单层膜 相互作用的差异，发现带负电荷磷脂与不饱和磷脂单层膜与肽的作用能力要强于饱和不 带电荷磷脂的单层膜，严格按照螺旋轮法则设计的肽GKI(KKII,12KII．NH2界面活性较 G(IIKK)3I．NH2好；借助圆二色光谱仪发现G(IIKK)xI．NH2(x=I，2，3，4)系列肽与 GKI(KKII：12KII．NH2在中性DPPC脂质体环境中为无规卷曲，在带负电荷DPPG脂质体 环境中为13,螺旋；在磷脂单层膜中加入胆固醇能够减弱这些肽与磷脂膜的相互作用能力； 金属离子Ca2+与Na+能够影响肽与磷脂膜的作用时效性；肽G(IIKK)3I-NH2对Escherichia coli 5a提取总脂质单层膜的作用能力要强于Bacillus subtilis 168的。根据以上研究推测， 合成G(IIKK)xI-NH2(x=I，2，3，4)系列肽在与细菌细胞作用时，首先以细胞质膜上带负电磷 脂、脂质和不饱和磷脂为优先作用对象，随之发生结构转变，进一步破坏质膜的稳定性 和完整约束性并导致质膜破损；同时由于肽结构转变形成了规则的两亲性螺旋结构，易 化了其进入胞内的过程，使其可能进入胞内与一些带负电荷的生物大分子作用，影响细 胞正常的生理功能。 关键词：螺旋抗菌肽，LB单层膜，界面活性 AbstractDuring Abstract During the past several years，Multi-drug resistence bacteria have been influencing the antibiotics activity．Amtimicrobial peptides are ancient components of the innate immune system and have been isolated from tissues and organisms ranging from prokaryotes to humans，and some of them have been used in clinic．But the technologies of isolation and purification are costly and difficult．Among the various antimicrobial peptides，Q-helical cationic antimicrobial peptides possess either selectivy activity toward a certein type of cell or microorganism，or a broad spectrum of activity toward several types of cells including prokaryotic and mammalian cells．Since the 1 980s，a number of models for peptide interaction wim membrane have been proposed，such as‘barrel stave”，toroid pore”and “carpet mechanism”，but the mechanisms of antimicrobial peptides action following their