磷酸脂配体体外激活人γδT细胞的特征和γδT细胞抗肿瘤作用的进一步研究-细胞生物学专业论文.docx

磷酸脂配体体外激活人俩T细胞的特征 磷酸脂配体体外激活人俩T细胞的特征 和丫6 T细胞抗肿瘤作用的进一步研究 摘要 y6 T细胞是80年代后期发现的一类新型T淋巴细胞，由y 和6两条多肽链构成TCR。目前虽然对76 TCR的基因结构和发 T 原识别和生物学功能还 别包括肽类抗原和非肽 可能参与机体抵抗微生 此，}7深入研究Y6 T细胞 育很类物的 有不抗、免 了清原病疫 一楚在毒学 翩心蝴槲鞭 了有多瘤有 解的种感重 ，研不染要 但究同的的 有显类多理 关示型种论 归归的免和 T抗疫实 细细原应际 胞胞，答意 的能并。义 抗识且因。 人／6T细胞最显著的特 点是能够识别非肽类的磷酸分子，磷酸一乙脂(monoethyl phosphate，MEP)是第一个人工合成的Y6 T细胞的非肽类配体， 可被人V79／V82 TCR特异性识别。本实验中，我们首先进一步 研究了MEP对人外周血76 T细胞的选择性扩增，其次对辅佐细 胞在MEP激活恼T细胞的作用进行了初步的探讨，最后对激活 的忙T细胞在体外的抗肿瘤作用作了迸一步的研究。 一、MEP体外选择性扩增人外周血Y6 T细胞的特征 Y6 T细胞在正常人外周血中含量很少，体外建立大量扩增Y6 T细胞的方法对于Y6 T细胞的研究和应用都很有意义。／本实验 中，我们用观察到MEP充分扩增Y6 T细胞需要有IL-2的存在， 不同浓度的IL．2影响丫6 T细胞的绝对数，但对丫6 T细胞的百分 含量无明显影响。MEP和IL一2协同刺激可诱导人外周血Y6 T细 胞大量选择性扩增。尽管MEP激活y6 T细胞形态与口p T细胞相 似，但表达不同的表面分子，MEP激活的恼T细胞很少表达CD4 和CD8分子，高表达CD45RO分子。对v6 T细胞基因表达的研 究显示，MEP和IL．2都能使恼T细胞活化，表达激活标记IL．2 受体a链。但IL．2还能促进与细胞增殖相关的C-myc基因的表达， 而MEP对c—myc基因的表达无明显作用。这可能从一个方面解 释了MEP和IL一2协同扩增Y6 T细胞的分子机制。心 二、辅佐细胞在MEP激活Y6 二、辅佐细胞在MEP激活Y6 T细胞中的作用 利用MEP体外选择性扩增Y6 T细胞的模型，我们进一步研 究了辅佐细胞在Y6 T细胞识别MEP中的作用。(我们的实验发现， MEP充分扩增Y6 T细胞需要有辅佐细胞的存在，辅佐细胞的作 用有浓度依赖性。辅佐细胞分泌的上清不能使MEP充分激活Y6 T 细胞。而且，单抗阻断实验提示MEP诱导Y6 T细胞增殖不仅需 要伯TCR对MEP的识别，可能还需要细胞表面的协同刺激因子 提供第二信号。因此，Y6 T细胞识别MEP可能需要Y6 T细胞和 辅佐细胞的接触。另外，同种异体辅佐细胞也能使MEP充分扩 增Y6 T细胞，提示徊T细胞对抗原的识别无MHC．限制性。而与 MEP孵育后的辅佐细胞不能有效扩增Y6 T细胞。J ／＼ 三、MEP激活的Y6 T细胞在体外的抗肿瘤作用的进一步研究 应用3H．TdR释放法，我们观察了MEP扩增的俩T细胞在 体外对多种肿瘤细胞株的细胞毒作用。戡们的实验显示，Y6 T细 胞对结肠癌、肺癌和肝癌等不同组织类型酌肿瘤细胞株有非MHC 限制性的细胞毒作用。MEP激活的Y6 T细胞表达穿孔素和FasL 等与杀伤作用有关的效应分子，并且恼T细胞对肝癌细胞株 SMMC772l的杀伤作用有显著的Ca2+依赖性。因此，Y6 T细胞 对肝癌细胞的杀伤可能主要通过穿孔素／颗粒酶途径。本实验中， 我们观察到多种肿瘤细胞表面高表达层粘连蛋白受体(1aminin receptor．LR)。单抗阻断实验显示抗LR单抗可以部分阻断Y6 T 细胞对高表达LR的肿瘤细胞的杀伤，而不影响Y6 T细胞对不表 达LR的肿瘤细胞的杀伤。这一初步的结果提示LR可能参与了76 T细胞与肿瘤细胞的相互作用。又 综上所述，本实验进一步研究了人外周血76 T细胞识别非 肽类配体MEP的免疫学特征及MEP扩增的Y6 T细胞的体外抗 肿瘤作用。以上初步的结果显示，Y6 T细胞与0【p T既有相似的 生物学功能，又有不同的免疫学特征。这些研究将有助于全面了 解T细胞介导的免疫应答和抗肿瘤免疫机制。 关键词 徊T细胞，．磷酸一乙脂， 抗原识别， 辅佐细胞， 细胞毒作用 Study Study on Characteristics of the Activation-of Human 1，6 T Cells by Phosphate Ligand and Antitumor Activity of丫6 T Cells in vitro Abstract The identification of38 T lymphocyte came out