莱菔硫烷改善肝细胞脂肪变及内质网调控机制-食品科学与工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Classified Index: R151.3 U.D.C.: 614 Dissertation for the Master Degree in Engineering IMPROVEMENT OF ABNORMAL FAT METABOLISM BY SULFORAPHANE THROUGH THE ENDOPLASMIC RETICULUM IN HEPATOCYTES Candidate: Tian Sicong Supervisor: Professor Shan Yujuan Academic Degree Applied for: Master of Engineering Speciality: Food Science and Engineering Affiliation: School of Food Science and Engineering Date of Defence: June 26, 2014 Degree-Conferring-Institute Harbin Institute of Technology 哈尔滨工业大学硕士学位论文 哈尔滨工业大学硕士学位论文 摘 要 非酒精性脂肪肝是高发且严重危害人类健康的饮食相关性肝损伤，从膳食 角度寻找其防治因子具有重要意义。前期研究表明莱菔硫烷（SFN）可减轻酒 精性肝损伤及调控脂代谢，但对非酒精性肝损伤的作用及机制尚无深入探讨。 本研究探讨 SFN 预保护人肝细胞 HHL-5 后，能否抵抗油酸/软脂酸对肝细胞脂 代谢的病理性损伤，重点探究内质网应激调控通路的作用 ，主要研究结果如下。 油酸/软脂酸（1:2）作诱导剂，100-500 μmol/L 作用于 HHL-5 细胞，油红 O 染色检测脂滴，再检测肝细胞代谢酶和甘油三酯（TC）及胆固醇（TG），发现 油酸/软脂酸 300 μmol/L 时，多数细胞内出现红色圆珠状且非常饱满的脂滴，诱 导剂剂量增大，脂滴增多。油酸/软脂酸（1:2）300 μmol/L 作用 24 h，TC 和 TG 含量明显升高（P0.01），谷丙转氨酶（ALT）与谷草转氨酶（AST）活性显著 升高；诱导剂浓度大于 400 μmol/L，细胞死亡。因此，将油酸/软脂酸（1:2）300 μmol/L 作用 24 h 作为诱导肝细胞 HHL-5 脂代谢异常的作用方式。SFN 分别以 时间效应和剂量效应方式预保护细胞，再用油酸/软脂酸刺激 24 h，发现 TG 和 TC 含量与阳性对照组比较显著降低（P0.01），10 μmol/L SFN 对 TG 与 TC 含 量降低最为明显，抑制 AST 和 ALT 增加，抑制后水平与阴性对照组接近。 以内质网为切入点，透射电镜检测结果表明，油酸/软脂酸作用细胞 24 h 可引起内质网扩张，提示内质网功能受损，同时影响线粒体功能，表现为线粒 体颜色加深。SFN 预保护后能明显改善内质网的扩张，内质网结构基本恢复到 阴性对照组水平，表现为内质网成条索状，并对线粒体损伤明显改善。Real-time PCR 检测内质网调控蛋白 XBP1、GRP78 转录水平的表达情况。发现油酸/软脂 酸（1:2）300 μmol/L 诱导肝细胞 24 h 后，XBP1 与 GRP78 mRNA 表达量显著 增加。10 μmol/L SFN 使二者表达量比诱导组降低。SFN 作用时间延长，XBP1 与 GRP78 mRNA 表达量减小，24 h 最显著。流式细胞术检测内质网调控网络中 心调控因子 Ca2+，发现油酸/软脂酸能诱导内质网中 Ca2+流出，胞浆中 Ca2+浓度 升高明显高于阴性对照组。随着 SFN 作用浓度增加，胞浆中钙离子浓度下降。 本研究结果表明，SFN 能明显改善油酸/软脂酸引起的肝细胞脂代谢异常， 内质网调控在其中发挥重要作用。本研究将为 SFN 的开发应用提供理论基础。 关键词：莱菔硫烷；肝细胞；内质网应激；钙离子 - I - Abstract Non-alcoholic fatty liver disease is the high incidence of serious harm to human health and looking from the perspective of their dietary prevention factor is of great significance. Studies have been shown that sulforaphane (SFN) can reduce the effects of alcohol-induced injury on liver and regulate lipid metabolis