MTT测定细胞增值抑制率.docVIP

试验原理 MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。 检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。 试验准备 1. MTT 的配置 MTT 一般最好现用现配，过滤后 4℃?避光保存两周内有效，或配制成 5 mg/ml 保存在 -20℃长期保存，避免反复冻融。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。可把 MTT 粉末称量分装在 EP 管里，用的时候现配。当 MTT 变为灰绿色时就绝对不能再用了。配制 MTT 时用 PBS（pH=7.4）溶解， 60℃ 水浴助溶。MTT 加入细胞前还是需要以过滤的方式灭菌为宜 MTT 有致癌性，MTT 对细菌很敏感，配成的 MTT 需要无菌。往 96 孔板加MTT时可以把