免疫学实验设计.pptVIP

T淋巴细胞转化试验 实验原理： 淋巴母细胞的主要特点： （1）形态学改变:细胞体积明显增大,为成熟淋巴细胞3-4倍。核膜清晰,核染色质疏松呈网状。核内见明显核仁1-4个。胞浆丰富,嗜碱性,有伪足样突出。胞浆内有时可见小空泡。 （2）细胞内核酸和蛋白质合成增加。 （3）细胞代谢功能旺盛。 实验材料： 肝素（每毫升含100单位） 199培养液（内含20% 灭活小牛血清 青霉素100单位每毫升 链霉素100微克每毫升） PHA（每毫升含100单位） 无菌注射器及枪头 试管 吸管等 实验步骤： 1 采肝素抗凝血1-2毫升（1毫升血中加肝素20单位）充分混匀。37℃静置1-2h。红细胞沉淀后，吸取血浆层并捎带些红细胞，移入另一无菌试管中。计算淋巴细胞数并离心10分钟，弃上清液。用199培养液将沉淀的淋巴细胞配成1*107每毫升细胞悬液。 2 取细胞悬液0.6毫升加入含有2.4毫升199培养液的培养瓶中。 3 按每毫升30微克PHA加入PHA。 4 37℃ 67-72h，培养过程中每天翻动培养瓶1-2次。 实验步骤： 5 培养后震动培养瓶，将细胞重新悬起，然后移入试管中。 6 1000rpm离心5分钟。 7 尽量去除上清液，将沉淀物混匀，取一滴放在载玻片上推成血膜干燥。用瑞特氏染液染色，镜检。 * * 小组成员：王志高 李河川 李世学 刘有为 李天才 孟晓光 免疫学：创新实验设计 正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中受到特异性抗原或有丝分裂原刺激，可转化为淋巴母细胞。细胞免疫缺陷时，患恶性肿瘤或某些其他疾病时，转化率显然降低。目前最常用植物血凝素（PHA）作为分裂原检测受试者的淋巴细胞转化率，从而判定其细胞免疫功能。 注：淋巴细胞转化率=转化淋巴细胞数/（转化数+未转化数） 转化率的正常值约为60-70% 表3-5 转化淋巴细胞的判断标准 无 有或无 常可见 伪 足 无 有或无 常可见 空 泡 ++～+ +++～++ ++++ 嗜碱性 较少，常呈一窄环 稍宽 丰富，核之一侧较宽广 量 胞 浆 无 无 有时可见 有丝分裂 无 有或无 清晰，可见1～3个 核 仁 致密团聚 较疏松 疏松，呈粒状 染 色 质 多位于中央 中央或稍偏 多偏于一侧，少数位于中央 位 置 胞 核 6～8μm 12～16μm 10～20μm或更大 胞体大小（直径） 过渡型细胞 淋巴母细胞 未转化的淋巴细胞 转化的淋巴细胞 细胞类别 形态特征 *