榄香烯治疗颅内恶性肿瘤的系列研究-外科学(神经外科)专业论文.docxVIP

榄香烯治疗颅内恶性肿瘤的系列研究 榄香烯治疗颅内恶性肿瘤的系列研究 上海第二医科大学博士学位论文 榄香烯治疗颅内恶性肿瘤的系列研究 博士研究生：徐英辉 导 师：罗其中教授 摘要 神经胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，预后极差。近20年来，胶质瘤患 者的中位生存期无明显改善，其中胶质母细胞瘤手术切除后综合治疗的中位缓 解期只有24周uJ。传统放、化疗方法的严重毒副作用限制了剂量及疗程。因 此，积极寻找有效、安全的药物加强缓解期的治疗已成为延长肿瘤复发、改善 预后的关键，也是神经科学最富有挑战性而又最亟待解决的一个难题。 榄香烯是从中药莪术中分离出来的抗癌耨药，是我国医药工作者经过近二十 年研究，自行开发的国家二类抗肿瘤药。60年代，莪术抗肿瘤作用的体外实验研 究已有报道；70年代，首次运用莪术治疗宫颈癌并获初步成效；80年代，先后 在温莪术挥发油中分离并定出lO多种化合物，其中B～榄香烯含量最多【2J；90 年代初，侯菊生教授等首次将榄香烯用于颅内恶性肿瘤的治疗并取得令人鼓舞的 成果【3J。因此，人们对其进行了大量实验及临床研究，山于其低毒、高效和广谱 等优点，日益受到医学界的重视，并被广泛用于治疗多种肿瘤。 榄香烯对肿瘤细胞有明显的增殖抑制作用：周洪语等应用改良M T T法、3H ．TdR参入法及集落形成实验分别检测榄香烯对胶质瘤C6／SItG一44细胞系的增嫡 抑制作用，发现榄香烯效能有效抑制C6／SHG．44胶质瘤细胞的恶性增殖，对胶质 瘤细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性，随着药物浓度的增加，榄香烯的抑制作用 增强。在同一作用浓度下具有时间依从性关系，随着药物作用时间的延长，抑制 作用增强141。 诱导肿瘤细胞凋亡是药物抗肿瘤作用的重要}JL,带rl之一，体外实验发现榄香烯 可以诱导肿瘤细胞的凋亡。细胞凋亡是多基因调控下的细胞程序性死亡，多个癌 基因与抑癌基因参与了这个调控过程。实验证明榄香烯诱导肿瘤细胞凋亡是其抗 榄香烯治疗颅内恶性肿瘤的系列研究 榄香烯治疗颅内恶性肿瘤的系列研究 上海第二医科大学博士学位论文 肿瘤的重要机制。多位学者睁“一瑚19“01在不同肿瘤细胞的体外研究中发现：榄 香烯可诱导肿瘤细胞凋亡，该作用办存在时间与剂量依赖性，随作用时间延长和 药物浓度的增高，凋亡细胞比例明显增加。荧光显微镜和透射电镜观察到典型的 细胞凋亡特征：核染色质浓缩边集，核固缩、核碎裂，胞浆浓缩并可见到凋亡小体。 DNA凝胶电泳表现特征性梯状带，流式细胞分析在DNA组方图上出现典型的细 胞凋亡峰(A P峰)，原位末端标记(terminal deoxynucleotidyl-transferase—mediated dUTP—biotinnick endlabeling，TUNEL)可见阳性标记的凋亡细胞等。 B一榄香烯对荷瘤动物具有抑制肿瘤细胞和提高机体免疫功能的“双重效 应”。左云飞等[71研究发现榄香烯不仅能有效抑制小鼠移植性肿瘤的生长，同时能 增强小鼠NK细胞、腹腔巨噬细胞对移植性瘤株的杀伤力，以及机体脾细胞的增 殖率，并且促进IL一2的增加，从而增强机体的免疫功能，抑制肿瘤的生长。在列鼠脑 神经胶质细胞瘤G422的研究中发现【9】：榄香烯能直接杀伤G422肿瘤细胞使其坏 死并提高机体IL一2，TNF的水平，增强机体T细胞免疫功能达到抗肿瘤的作用。榄 香烯在肿瘤的复发中也有作用，尤其是在治疗脑转移瘤的复发中有作用。不仅如 此，榄香烯与其它化疗药联合使用，对化疗药引起的骨髓抑制有一定的改善和预防 作用，提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，甚至可以逆转晚期患者对化疗药物的耐 药性‘n32]。 综上所述，榄香烯属非细胞毒性抗肿瘤药物，它能有效抑制多利，肿瘤细胞的 生长增殖。其抗肿瘤的主要机制是诱导肿瘤细胞凋亡和分化。同时，榄香烯能增 强肿瘤的免疫原性，改善和提高荷瘤机体的细胞免疫功能。此外，榄香烯还具有抗 肿瘤转移、毒副作用小和不易耐药等优点，具有良好的应用前景。虽然对榄香烯 的抗肿瘤作用已作出了多方面解释，但我们发现本领域的研究还缺少系统和深入 ，尤其是对于榄香烯的作用部位、作用通路，以及榄香烯对癌基因、抑癌基因的影 响等还有待阐明。本研究正是针对以上问题而进行的。 第一部分榄香烯对大鼠胶质瘤c6细胞Bcl一2家族基因蛋白表达的影响 探讨莪术提取物B一榄香烯诱导大鼠胶质瘤c6细胞系凋亡机制及对Bcl一2 家族基因及蛋白表达的影响。采用RT-PCR、Western blot方法检测榄香烯在不同 浓度(0、20、40、60、80ug／m1)、不同作用时fiJ(12、24、36、48、72h)处理大 鼠胶质瘤c6细胞系后，利用流式细胞仪观察细胞的凋亡，观察细胞增殖的变化 榄香